资料摘要
资料下载PCR 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一dna片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。 PCR引物设计 引物设计是PCR 技术中至关重要的一环。使用不合适的PCR 引物容易导致实验失败:表现为扩增出目的带之外的多条带(如形成引物二聚体带),不出带或出带很弱,等等。现在PCR 引物设计大都通过计算机软件进行。可以直接提交模板序列到特定网页,得到设计好的引物,也可以在本地计算机上运行引物设计专业软件。 引物设计的原则 引物与模板的序列要紧密互补 引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构 引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。 具体因素 如引物长度(primer length),产物长度(product length),序列Tm 值(melting temperature),引物与模板形成双链的内部稳定性(internal stability, 用?G 值反映),形成引物二聚体(primer dimer)及发夹结构(duplex formation and hairpin)的能值,在错配位点(false priming site)的引发效率,引物及产物的GC 含量(composition),等等。必要时还需对引物进行修饰,如增加限制性内切酶位点,引进突变等。 一般原则 1.引物的长度一般为15-30 bp,常用的是18-24 bp,但不应大于38。 引物过短又同时会引起错配现象,一般来说引物长度大于16bp是必要的(不容易引起错配)。 例如:一个长度为12bp的引物在人类基因组上存在200个潜在的退火位点(3 x 109/412=200 ).而一个长度为20bp的引物在人基因组上存在的退火位点只有1/400个. 较长的引物(28-35bp) 一般是用来区分同源性较高的模板序列或者使用于产生一些突变位点 Tm值的计算 一般的公式 Tm = 4 (G+C) + 2(A+T) 对于长一些的引物可用更为准确的 nearest-neighbor (Frier et al. (1986) ) 2. 引物序列在模板内应当没有相似性较高,尤其是3’端相似性较高的序列,否则容易导致错配。引物3’端出现3 个以上的连续碱基,如GGG 或CCC,也会使错误引发机率增加。 3,引物3’端的末位碱基对Taq 酶的DNA 合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率,末位碱基为A 的错配效率明显高于其他3 个碱基,因此应当避免在引物的3’端使用碱基A。另外,引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR 反应失败。5’端序列对PCR 影响不太大,因此常用来引进修饰位点或标记物。 4. 引物序列的GC 含量一般为40-60%,过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。 不同的算法推荐45-55%或50-60% 5. ?G 值是指DNA 双链形成所需的自由能,该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端?G 值较低(绝对值不超过9),而5’端和中间?G 值相对较高的引物。引物的3’端的?G 值过高,容易在错配位点形成双链结构并引发DNA 聚合反应。(能值越高越容易结合) 6. 对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点,应根据下一步实验中要插入PCR 产物的载体的相应序列而确定。 7. 引物二级结构对PCR反应的影响。 尽可能少的引物二聚体。
葡萄糖测定试剂盒(葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法)
简介:英文名称:PLP;Pyridoxal-5-phosphatemonohydrate;Pyridoxal-5-monophosphoricacidester;3-Hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methylisonicotinaldehyde5-phosphate;Codecarboxylase 其他名称:5-磷酸吡哆醛;吡多醛5-单磷酸酯;3-羟基-2-甲基-5-[(膦酰氧基)甲基]-4-吡啶甲醛一水合物;磷酸吡醛素;吡哆醛-5-磷酸酯;3-羟基-5-羟甲基-2-甲基异烟酰;辅脱羧酶 CAS号:41468-25-1 C8H10NO6P?H2O=265.15 级别:AR 含量:≥99.0% 维生素B6:≤0.5% 干燥失重:≤10.0% 重金属:≤20ppm PH(0.25%agSolution):2.6~3.0 性状(以下信息仅供参考):类白色至淡黄色或黄色粉末。熔点140~143℃。几乎无气味。无味。见光缓慢分解。易溶于甲酸、含水吡啶和稀碱液,微溶于水、乙醇、丙酮、乙醚、氯仿和苯。水溶液在冷而避光处很稳定,0℃时3周
微生物检测冻干粉质控菌种说明书
简介:阿尔茨海默病(AD)是一种全球范围内患病人口较多的神经退行性疾病。 自发病起,患者的认知功能会逐渐衰退,病理表现为大脑中β淀粉样蛋白(Aβ)的累积、过度磷酸化的tau蛋白导致的神经纤维缠结以及神经炎症。 cGAS-STING通路是哺乳动物细胞检测外源DNA,并激活先天免疫反应的重要通路。它在缺血性脑损伤、帕金森病、亨廷顿病、脊髓侧索硬化症等神经疾病的发生发展中有重要作用,但是,cGAS-STING通路是否参与AD仍不清楚。 近日,由中国科学院昆明动物研究所的曾健雄和美国南加州大学的赵振领衔的研究团队,在国际顶尖杂志《自然·衰老》发表关于cGAS-STING通路参与AD的最新研究成果[1]。 他们发现在人类AD患者和衰老小鼠大脑中,cGAS与细胞质中的双链DNA结合,激活cGAS-STING通路,而敲除Cgas可以抑制AD模式小鼠的Aβ累积、神经炎症以及认知衰退。 他们还发现,STING抑制剂H-151可以显著抑制AD模式小鼠大脑中cGAS-STING通路的激活,抑制AD病理进程。 总的来说,这项研究揭示了先天免疫通路cGAS-STING和AD之间的重要联系,靶向
雌二醇 特价促销 350/25g
简介:英文名称:Estradiol;1,3,5-Estratriene-3,17beta-diol;17beta-Estradiol;3,17beta-Dihydroxy-1,3,5(10)-estratriene;Dihydrofolliculin 其他名称:β-雌二醇;雌甾二醇;雌甾-1,3,5-(10)-三烯-3β,17β-二醇;β-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇;3,17β-二羟基-1,3,5(10)-雌甾三烯-3,17β-二醇;β-雌激素 CAS号:50-28-2 C18H24O2=272.38 含量:≥98.0% 熔点:173~179℃ 比旋光度:+76~+83°(C=2,5mol/LHCl) 水分:≤3.5%(KARLFISCHER) 性状(以下信息仅供参考):白色或乳白结晶性粉末;无臭。本品在二氧六环、丙酮中溶解,在乙醇中略溶,在水中不溶。比旋度取本品,精密称定,加二氧六环溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液,依法测定。 用途:本品仅供科研,不得用于其它用途。 保存:2~8°C
红豆杉染色体水平基因组测序完成
简介:紫杉醇是目前已发现的最优秀的天然抗癌药物。紫杉醇生物合成途径已研究多年,而超大的基因组和复杂的代谢路线是途径解析的主要限制因素。中国科学院天津工业生物技术研究所与西北工业大学、深圳华大生命科学研究院等合作,首次完成了喜马拉雅红豆杉超10Gb的染色体水平的全基因组测序,并通过复杂基因组组装与分析,解析了红豆杉中生物合成紫杉醇的关键基因簇,探索了紫杉醇合成途径的起源与进化机制,为完全解析紫杉醇生物合成途径奠定了重要基础。 全基因组倍增事件是开花植物提升环境适应能力,并逐渐替代裸子植物,遍布地球的主要原因。通过对裸子植物喜马拉雅红豆杉基因组的进化分析,研究发现在地球上存活更久的红豆杉却几乎没有经历过明显的全基因组倍增事件,而是发生了大量的基因串联重复事件,其比例超过了几乎所有已知的开花植物。大量基因串联重复导致红豆杉中的一些基因家族急剧扩张,随着这些家族重复基因的功能分化,红豆杉进化出非常复杂的代谢物合成和转录调控网络。例如,与紫杉醇合成密切相关的细胞色素P450酶家族与酰基转移酶家族,通过串联复制都产生了超过50份基因拷贝,如此多的重复基因为红豆杉进化出极其复杂的紫杉醇合成途径提供了遗传基础。迄今为止,已在紫杉科的植物中发现了超过500种具有紫杉烷类天然产物。因此,大量的基因串联重复是红豆杉中紫杉醇合成途径形成的主要进化机制,也可能是红豆杉能在地球上存活至今的重要原因之一
革兰氏染色液 4X10ml 促销 30/盒
简介:.涂片经火焰固定,加(结晶紫溶液)溶液A染1分钟,用清水冲去染液。 2.加(碘液)溶液B染1分钟,水洗。 3.加(95%乙醇)溶液C,不时摇动玻片约10-30秒,至无紫色脱落为止,水洗。 4.加(沙黄复染液)溶液D,染1分钟,水洗。 5.干后油镜镜检。阳性菌呈紫色、阴性菌呈淡红色。
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