资料摘要
资料下载一、核酸的纯化 在分子克隆的所有操作中,最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质,通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时,可进行这种抽提。然而,如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸,则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后,再用有机溶剂抽提。这些广谱的蛋白酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶K等,它们对多种天然蛋白均有活性,(1)用酚氯仿抽提:这两种有机溶剂合用,比单独用酚抽提的除蛋白效果更佳。继而用氯仿抽提则可除去核酸制品中的痕量酚。①核酸样品置有盖小离心管中,加入等体积的酚/氯仿。②旋涡混匀管内容物,使呈乳状。③12000×g室温离心15秒。④水相移入另一离心管,弃去两相界面和有机相。⑤重复步骤①-④步操作,直至两相界面上见不到蛋白质为止⑦按下述核酸浓缩法沉淀回收核酸。 二、核酸的浓缩 应用最广的核酸浓缩法是乙醇沉淀法。在中等浓度单价阳离子存在下,加入一定量的乙醇后,所形成有核酸沉淀可经离心而回收,甚至对低至pg量的DNA或RNA,也可定量回收。回收的核酸可按所需浓度,再溶于适当的缓冲液中。 具体操作时,可向含样品的小离心管中加入V/10单价阳离子盐贮存液2V无水乙醇,混匀,放冰水浴中15-30min,取出目测平衡,0-4度,12000g,离心10min。吸弃上清,再另70%乙醇0.5-1ml,12000g,0-4度洗涤离心2min。吸弃上清,沉淀用油泵抽干或打开盖子晾干后,溶于适当体积的缓冲液中。 *:当加醋酸铵时,需加入DNA液的V/2。 单价阳离子盐的选择,主要基于下述考虑:用醋酸铵可减少dNTP的共沉淀,但在以后要作核酸的磷酸化时应避免用醋酸铵,因铵离子是T,多核苷酸激酶的强烈抑制剂。当用较高浓度的乙醇沉淀RNA时,常用LiCl,因LiCl在乙醇中溶解度很高,不随核酸共沉淀。含有SDS的核酸样品,应使用NaCl,这时该去垢剂要70%乙醇中仍保持可溶。DNA和RNA沉淀,大多使用醋酸钠(pH5.2 )。 三、DNA、RNA的定量 准确的方法是紫外分光光度法。但本法要求核酸样品是纯净的(即无显著的蛋白质、酚、琼脂糖或其它核酸、核苷酸等污染物的制品)。用紫外分光光度计测定260nm和280nm两个波长处的光吸收,然后,按IA260相当于50μg/ml双链DNA。40μg/ml单链DNA或RNA及20μg/ml单链寡核苷酸。计算你的样品含量。260nm和280nm两处读数的比值(A260/A280),可反映核酸的纯度。DNA和RNA纯品的A260/A280的值分别为1.8和2.0如果样品中有蛋白质或酚的污染,则A260/A280将明显低于此值,此时就无法对样品中的核酸进行精确定量。可将样品纯化后再作定量测定。有丰富实验室经验的人,仅凭样品电泳后溴化乙锭染色萤光带的强度,即可大致判断出样品中的核酸含量,故他们常不作核酸的紫外分光光度法定量。 四、核酸的凝胶电泳和分子量参照物 (一)琼脂糖凝胶电泳 可用于分离、鉴定和提纯DNA片段。本法操作简单、迅速,能分辨其它方法不能分开的DNA片段混合物,分开的DNA可用低浓度的萤光染料(0.5μg/ml溴化乙锭)染色,在紫外灯下直接观察检测少至1ng的DNA。 DNA通过琼脂糖凝胶的迁移率取决于以下参数:①DNA分子的大小:线奖双链DNA分子通过凝胶的速率与其分子量的常用对数成反比。据此用已知分子量的标准物质和待测分子量的DNA片段同时电泳,比较其电泳速率,即可求出待测片段的分子大小。②琼脂糖浓度:给定大小的DNA片段,以不同速度通过不同浓度的琼脂扩凝胶。因此利用不同
葡萄糖测定试剂盒(葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法)
简介:英文名称:PLP;Pyridoxal-5-phosphatemonohydrate;Pyridoxal-5-monophosphoricacidester;3-Hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methylisonicotinaldehyde5-phosphate;Codecarboxylase 其他名称:5-磷酸吡哆醛;吡多醛5-单磷酸酯;3-羟基-2-甲基-5-[(膦酰氧基)甲基]-4-吡啶甲醛一水合物;磷酸吡醛素;吡哆醛-5-磷酸酯;3-羟基-5-羟甲基-2-甲基异烟酰;辅脱羧酶 CAS号:41468-25-1 C8H10NO6P?H2O=265.15 级别:AR 含量:≥99.0% 维生素B6:≤0.5% 干燥失重:≤10.0% 重金属:≤20ppm PH(0.25%agSolution):2.6~3.0 性状(以下信息仅供参考):类白色至淡黄色或黄色粉末。熔点140~143℃。几乎无气味。无味。见光缓慢分解。易溶于甲酸、含水吡啶和稀碱液,微溶于水、乙醇、丙酮、乙醚、氯仿和苯。水溶液在冷而避光处很稳定,0℃时3周
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简介:阿尔茨海默病(AD)是一种全球范围内患病人口较多的神经退行性疾病。 自发病起,患者的认知功能会逐渐衰退,病理表现为大脑中β淀粉样蛋白(Aβ)的累积、过度磷酸化的tau蛋白导致的神经纤维缠结以及神经炎症。 cGAS-STING通路是哺乳动物细胞检测外源DNA,并激活先天免疫反应的重要通路。它在缺血性脑损伤、帕金森病、亨廷顿病、脊髓侧索硬化症等神经疾病的发生发展中有重要作用,但是,cGAS-STING通路是否参与AD仍不清楚。 近日,由中国科学院昆明动物研究所的曾健雄和美国南加州大学的赵振领衔的研究团队,在国际顶尖杂志《自然·衰老》发表关于cGAS-STING通路参与AD的最新研究成果[1]。 他们发现在人类AD患者和衰老小鼠大脑中,cGAS与细胞质中的双链DNA结合,激活cGAS-STING通路,而敲除Cgas可以抑制AD模式小鼠的Aβ累积、神经炎症以及认知衰退。 他们还发现,STING抑制剂H-151可以显著抑制AD模式小鼠大脑中cGAS-STING通路的激活,抑制AD病理进程。 总的来说,这项研究揭示了先天免疫通路cGAS-STING和AD之间的重要联系,靶向
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简介:英文名称:Estradiol;1,3,5-Estratriene-3,17beta-diol;17beta-Estradiol;3,17beta-Dihydroxy-1,3,5(10)-estratriene;Dihydrofolliculin 其他名称:β-雌二醇;雌甾二醇;雌甾-1,3,5-(10)-三烯-3β,17β-二醇;β-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇;3,17β-二羟基-1,3,5(10)-雌甾三烯-3,17β-二醇;β-雌激素 CAS号:50-28-2 C18H24O2=272.38 含量:≥98.0% 熔点:173~179℃ 比旋光度:+76~+83°(C=2,5mol/LHCl) 水分:≤3.5%(KARLFISCHER) 性状(以下信息仅供参考):白色或乳白结晶性粉末;无臭。本品在二氧六环、丙酮中溶解,在乙醇中略溶,在水中不溶。比旋度取本品,精密称定,加二氧六环溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液,依法测定。 用途:本品仅供科研,不得用于其它用途。 保存:2~8°C
红豆杉染色体水平基因组测序完成
简介:紫杉醇是目前已发现的最优秀的天然抗癌药物。紫杉醇生物合成途径已研究多年,而超大的基因组和复杂的代谢路线是途径解析的主要限制因素。中国科学院天津工业生物技术研究所与西北工业大学、深圳华大生命科学研究院等合作,首次完成了喜马拉雅红豆杉超10Gb的染色体水平的全基因组测序,并通过复杂基因组组装与分析,解析了红豆杉中生物合成紫杉醇的关键基因簇,探索了紫杉醇合成途径的起源与进化机制,为完全解析紫杉醇生物合成途径奠定了重要基础。 全基因组倍增事件是开花植物提升环境适应能力,并逐渐替代裸子植物,遍布地球的主要原因。通过对裸子植物喜马拉雅红豆杉基因组的进化分析,研究发现在地球上存活更久的红豆杉却几乎没有经历过明显的全基因组倍增事件,而是发生了大量的基因串联重复事件,其比例超过了几乎所有已知的开花植物。大量基因串联重复导致红豆杉中的一些基因家族急剧扩张,随着这些家族重复基因的功能分化,红豆杉进化出非常复杂的代谢物合成和转录调控网络。例如,与紫杉醇合成密切相关的细胞色素P450酶家族与酰基转移酶家族,通过串联复制都产生了超过50份基因拷贝,如此多的重复基因为红豆杉进化出极其复杂的紫杉醇合成途径提供了遗传基础。迄今为止,已在紫杉科的植物中发现了超过500种具有紫杉烷类天然产物。因此,大量的基因串联重复是红豆杉中紫杉醇合成途径形成的主要进化机制,也可能是红豆杉能在地球上存活至今的重要原因之一
革兰氏染色液 4X10ml 促销 30/盒
简介:.涂片经火焰固定,加(结晶紫溶液)溶液A染1分钟,用清水冲去染液。 2.加(碘液)溶液B染1分钟,水洗。 3.加(95%乙醇)溶液C,不时摇动玻片约10-30秒,至无紫色脱落为止,水洗。 4.加(沙黄复染液)溶液D,染1分钟,水洗。 5.干后油镜镜检。阳性菌呈紫色、阴性菌呈淡红色。
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