核酸分离提取的原则和要求

2016-06-15 07:39 下载量：1

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核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA为双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子；有些嗜菌体DNA有时为单链环状分子，RNA分子在大多数生物体内均是单链线性分子，不同类型的RNA分子可以具有不同的结构特点，如真核mRNA分子多数在3’端带有poly(A)结构，至于病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多种多样，有双链环状、单链环状、双链线状及单链线状等。 95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内，其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。RNA分子则主要存在于细胞质中，约占75%，另有10%在细胞核内，15%在细胞器中，RNA以rRNA的数量最多（80％-85%），tRNA及核内小分子RNA占10%-15%，而mRNA分子大小不一，序列各异。总的来说，DNA分子的总长度一般随着生物的进化程度而增大，而RNA的分子量与生物进化无明显关系。分离纯化核酸总的原则：1.应保证核酸一级结构的完整性；2.排除其它分子的污染。为了保证核酸结构与功能的研究，完整的一级结构是最基本的要求，因为遗传信息全部贮存在一级结构之中，核酸的一级结构还决定其高级结构的形式以及和其它生物大分子结合的方式。对于核酸的纯化应达到以下三点要求： 1.核酸样品中不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子； 2. 其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降到最低程度； 3. 排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时应去除RNA，反之亦然。为了保证分离核酸的完整性和纯度，在实验过程中，应注意以下事项： 1. 尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏； 2.减少化学因素对核酸的降解，为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH4-10的条件下进行；

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文献贡献者

上海士锋生物科技有限公司

铜牌会员 | 第11年

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