资料摘要
资料下载PCR实验中常遇见一些令人头疼的小问题,可能就是实验设计或者实验过程中一个小小的条件没有到位,就导致预期的实验结果出不来。下面,我们就来用一个典型的例子,看一看PCR过程中常见的问题之一:pcr扩不出条带。 例:首先从乳腺癌细胞MCF-7提取RNA,反转cDNA(09年9月),-20保存。现在以此cDNA作为模板,扩增雌激素受体基因(ESR1)的全长序列,1788bp,GC含量是57.27%。 引物是通过Prime5软件设计的,上游引物Tm =57,下游引物 Tm =62.9,通过Blast比对,确认设计的引物较好的特异性。我选用的两个内切酶分别是XhoI,EcoRI. 内参GAPDH能扩出来,但是不见目的条带,只有几百bp的非特异条带。 PCR体系: 模板 1ul 10um引物(上+下) 2ul 2.5mM dNTP 1ul taq酶 0.5 10*buffer (15mM Mg) 2 ddH2O 13.5 PCR的退火温度摸索过53,55,58,无果; 后来看了网上建议用touchdown PCR加热启动,能增强特异条带,还是无果。 我怀疑是不是体系的问题?还是需要重新提取RNA, 解答:PCR的反应条件和很多参数有着密切的关系。在实验设计中我们要考虑到模板浓度的大小,设计引物时也要主要引物长度适当以及恰当的GC含量,在PCR体系中引物浓度,dNTPs浓度相对要均衡,选取的taq enzyme,缓冲液的离子含量也是影响产物的结果,另外就是要根据产物大小设定适当的变性时间,退火温度及时间,延伸的时间。根据提问者上述的问题建议使用GC buffer,并且可适当调整引物和dNDP之间的比值。
葡萄糖测定试剂盒(葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法)
简介:英文名称:PLP;Pyridoxal-5-phosphatemonohydrate;Pyridoxal-5-monophosphoricacidester;3-Hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methylisonicotinaldehyde5-phosphate;Codecarboxylase 其他名称:5-磷酸吡哆醛;吡多醛5-单磷酸酯;3-羟基-2-甲基-5-[(膦酰氧基)甲基]-4-吡啶甲醛一水合物;磷酸吡醛素;吡哆醛-5-磷酸酯;3-羟基-5-羟甲基-2-甲基异烟酰;辅脱羧酶 CAS号:41468-25-1 C8H10NO6P?H2O=265.15 级别:AR 含量:≥99.0% 维生素B6:≤0.5% 干燥失重:≤10.0% 重金属:≤20ppm PH(0.25%agSolution):2.6~3.0 性状(以下信息仅供参考):类白色至淡黄色或黄色粉末。熔点140~143℃。几乎无气味。无味。见光缓慢分解。易溶于甲酸、含水吡啶和稀碱液,微溶于水、乙醇、丙酮、乙醚、氯仿和苯。水溶液在冷而避光处很稳定,0℃时3周
微生物检测冻干粉质控菌种说明书
简介:阿尔茨海默病(AD)是一种全球范围内患病人口较多的神经退行性疾病。 自发病起,患者的认知功能会逐渐衰退,病理表现为大脑中β淀粉样蛋白(Aβ)的累积、过度磷酸化的tau蛋白导致的神经纤维缠结以及神经炎症。 cGAS-STING通路是哺乳动物细胞检测外源DNA,并激活先天免疫反应的重要通路。它在缺血性脑损伤、帕金森病、亨廷顿病、脊髓侧索硬化症等神经疾病的发生发展中有重要作用,但是,cGAS-STING通路是否参与AD仍不清楚。 近日,由中国科学院昆明动物研究所的曾健雄和美国南加州大学的赵振领衔的研究团队,在国际顶尖杂志《自然·衰老》发表关于cGAS-STING通路参与AD的最新研究成果[1]。 他们发现在人类AD患者和衰老小鼠大脑中,cGAS与细胞质中的双链DNA结合,激活cGAS-STING通路,而敲除Cgas可以抑制AD模式小鼠的Aβ累积、神经炎症以及认知衰退。 他们还发现,STING抑制剂H-151可以显著抑制AD模式小鼠大脑中cGAS-STING通路的激活,抑制AD病理进程。 总的来说,这项研究揭示了先天免疫通路cGAS-STING和AD之间的重要联系,靶向
雌二醇 特价促销 350/25g
简介:英文名称:Estradiol;1,3,5-Estratriene-3,17beta-diol;17beta-Estradiol;3,17beta-Dihydroxy-1,3,5(10)-estratriene;Dihydrofolliculin 其他名称:β-雌二醇;雌甾二醇;雌甾-1,3,5-(10)-三烯-3β,17β-二醇;β-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇;3,17β-二羟基-1,3,5(10)-雌甾三烯-3,17β-二醇;β-雌激素 CAS号:50-28-2 C18H24O2=272.38 含量:≥98.0% 熔点:173~179℃ 比旋光度:+76~+83°(C=2,5mol/LHCl) 水分:≤3.5%(KARLFISCHER) 性状(以下信息仅供参考):白色或乳白结晶性粉末;无臭。本品在二氧六环、丙酮中溶解,在乙醇中略溶,在水中不溶。比旋度取本品,精密称定,加二氧六环溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液,依法测定。 用途:本品仅供科研,不得用于其它用途。 保存:2~8°C
红豆杉染色体水平基因组测序完成
简介:紫杉醇是目前已发现的最优秀的天然抗癌药物。紫杉醇生物合成途径已研究多年,而超大的基因组和复杂的代谢路线是途径解析的主要限制因素。中国科学院天津工业生物技术研究所与西北工业大学、深圳华大生命科学研究院等合作,首次完成了喜马拉雅红豆杉超10Gb的染色体水平的全基因组测序,并通过复杂基因组组装与分析,解析了红豆杉中生物合成紫杉醇的关键基因簇,探索了紫杉醇合成途径的起源与进化机制,为完全解析紫杉醇生物合成途径奠定了重要基础。 全基因组倍增事件是开花植物提升环境适应能力,并逐渐替代裸子植物,遍布地球的主要原因。通过对裸子植物喜马拉雅红豆杉基因组的进化分析,研究发现在地球上存活更久的红豆杉却几乎没有经历过明显的全基因组倍增事件,而是发生了大量的基因串联重复事件,其比例超过了几乎所有已知的开花植物。大量基因串联重复导致红豆杉中的一些基因家族急剧扩张,随着这些家族重复基因的功能分化,红豆杉进化出非常复杂的代谢物合成和转录调控网络。例如,与紫杉醇合成密切相关的细胞色素P450酶家族与酰基转移酶家族,通过串联复制都产生了超过50份基因拷贝,如此多的重复基因为红豆杉进化出极其复杂的紫杉醇合成途径提供了遗传基础。迄今为止,已在紫杉科的植物中发现了超过500种具有紫杉烷类天然产物。因此,大量的基因串联重复是红豆杉中紫杉醇合成途径形成的主要进化机制,也可能是红豆杉能在地球上存活至今的重要原因之一
革兰氏染色液 4X10ml 促销 30/盒
简介:.涂片经火焰固定,加(结晶紫溶液)溶液A染1分钟,用清水冲去染液。 2.加(碘液)溶液B染1分钟,水洗。 3.加(95%乙醇)溶液C,不时摇动玻片约10-30秒,至无紫色脱落为止,水洗。 4.加(沙黄复染液)溶液D,染1分钟,水洗。 5.干后油镜镜检。阳性菌呈紫色、阴性菌呈淡红色。
相关产品
三聚氰酸
牛丙酮检测(acetone)ELISA测试盒
苏云金芽孢杆菌蛋白(BT)ELISA测试盒
黄曲霉毒素(AFT)ELISA测试盒
大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coli P)ELISA测试盒
α-银环蛇毒素(α-BGT)ELISA测试盒
植物维生素C(VC)ELISA测试盒
植物25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA测试盒
植物维生素B6(VB6)ELISA测试盒
植物维生素D(VD)ELISA测试盒
植物维生素D3(VD3)ELISA测试盒
植物维生素D2(VD2)ELISA测试盒
植物维生素E(VE)ELISA测试盒
植物维生素A(VA)ELISA测试盒
植物维生素B12(VB12)ELISA测试盒
关注
拨打电话
留言咨询