胚胎干细胞培养标准化操作规程

2017-02-28 07:50  下载量:0

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多能性胚胎干细胞产生于小鼠胚泡 1.表达绿色荧光蛋白(EGFP)的B5-ES细胞。由Dr. Nagy的实验室制备。 2.D3-ATCC; CRL-1934. 我们得到时大约传了17代。 3.J1-由Dr. Jaenish的实验室友情提供。我们得到时大约传了7-9代。 4.J1rtTA-rtTA表达J1细胞,由Dr. Jaenish的实验室友情提供。 5.表达黄色荧光蛋白的YC5-ES细胞,由Dr. Nagy的实验室提供。 一般培养--维持ES细胞处于未分化状态 ES细胞培养用含有ESGRO(白血病抑制因子)的高糖培养基来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1%明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2-3天从达到80%-90%融合的平板按1:8的比率传代细胞一次,细胞传代以后,在将细胞接种在0.1%明胶包被的培养皿之前,通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时,使分化细胞粘附,从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃,5%CO2,100%湿度条件下培养。

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