人类体细胞染色体标本制备与核型分析

2017-04-05 07:35  下载量:0

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.采血器材、酒精灯、培养瓶、超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、刻度离心管、乳头吸管、试管架、量筒、试剂瓶、载玻片、吹风机、托盘天平、显微镜、镜油、二甲苯、擦镜纸、镊子、烧杯、记号笔、玻片架、火柴、10ml注射器。 2.RPMI 1640液体培养基、小牛血清、肝素(500 U/ml)、植物血凝素(PHA)、秋水仙素(10mg/ml)、KCl低渗液(0.075mol/L)、甲醇、冰乙酸、Giemsa原液、磷酸缓冲液(PH6.8)。 3.2.5%胰酶溶液(hanks液配制)、0.4%酚红、Giemsa染色液、1N盐酸、1N氢氧化钠。 【实验步骤】 一.外周血淋巴细胞染色体标本制备与分析 1. 采血及接种培养 1.1 在酒精灯火焰上,用灭菌注射器(一次性注射器)抽取肝素0.2ml,使肝素湿润至管壁。 1.2 常规消毒后,采集外周静脉血5ml,转动注射器使血液与肝素混匀。 1.3 在超净工作台中,预先将RPMI 1640液体培养基(5ml,含植物血凝素60mg/ml、10%小牛血清)加入消毒好的小培养瓶中,再滴加25滴全血(6号针头),水平摇动混匀。 1.4 置37℃恒温培养箱中培养72小时。培养过程中每天水平摇动培养物1~2次,使血液均匀悬浮,再继续培养。 1.5 终止培养前2~4小时,加入秋水仙素,使终浓度达到0.2μg/ml。轻轻摇动培养瓶,使秋水仙素混匀。继续培养至72小时。

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