二苯胺法测定DNA含量的实验方法

2017-08-28 07:08  下载量:3

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NA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解,产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊酸,后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物,其反应如下图。 蓝色化合物在595nm处有最大吸收,且DNA在40µg ~400µg范围内时,吸光度与DNA浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度。 二苯胺法测定DNA含量的实验方法 【实验材料】 1.实验器材 恒温水浴,721分光光度计。 2.实验试剂 (1)DNA标准溶液:准确称取小牛胸腺DNA10mg,以0.1mol/L NaOH溶液溶解,转移至50ml容量瓶中,用0.1mol/L NaOH溶液稀释至刻度。浓度为200µg/m1; (2) DNA样品液:用上述实验方法提取的DNA样品 (3)二苯胺试剂:使用前称取1g结晶二苯胺,溶于100m1分析纯冰醋酸中,加60%过氯酸10m1混匀。临用前加入1m1 1.6%乙醛溶液。此溶剂应为无色。

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