免疫荧光染色技术广泛用于样本中待测标志物的含量分析，待测标志物在细胞内或细胞外的分布以及不同标志物之间的相互作用，在细胞水平和组织水平进行实验论证，有效衔接微观分子水平到宏观动物整体水平之间的研究工作。
在切片免疫荧光染色实验中，扫描成像是其中关键一环，高清的图像更利于后续的空间结构分析和精准的定量分析。因此，选择合适的切片扫描设备尤为重要。现有主要两大类，一类是以共聚焦显微镜为代表的设备，其成像效果佳，可有效去除背景荧光，但是操作复杂，使用门槛高，没有足够的经验很难拍出高质量的图片。另一类设备是玻片扫描仪，相对于共聚焦显微镜，操作简单易上手，然而主流的荧光切片扫描仪多是宽场成像（非共聚焦成像），图片的背景荧光强、图片质量差，无法精准定位和定量。
同时，这两类设备存在一些共性问题：易脱焦-扫描仪不能判断最佳的聚焦位置，尤其面对平整度较差的样本时更突出（图1）。此外还需要后期拼接——受限于工作机制，需要将整个样本分割成小块区域，逐个扫描之后再拼接完成，一定程度上导致图像在接缝处失真。由于CCD是采用面成像的工作原理，成像区域的中央和四周光强不一致，反映在图像上为中央明亮，周围暗淡，仍需要后期进行阴影校正。（图2）
图1（左）平整度较差的样本，扫描完成的图像四周出现明显脱焦 （右）传统扫描仪扫描后的图片，需要后期拼接和阴影校正，影响图片质量
在此背景下，法国Innopsys公司推出了InnoQuant荧光玻片扫描仪。这款设备利用激光共聚焦成像，逐点成像、整片一次扫描的技术，给免疫荧光染色技术带来了新的变革。
InnoQuant的优点
1.自动对焦
InnoQuant内置三种对焦模式：定焦（Fixed focus）、Autofocus by surface和Autofocus by content。除了定焦模式采用固定不变的焦距之外，另外两种模式可以根据样本的内部结构或者玻片自身的平整度，识别出最佳的聚焦平面，避免脱焦。
2.逐点扫描，无需拼接，无需阴影校正
不用于其他设备的多个分割区域扫描再拼接的方法，InnoQuant采用逐点扫描，一次成像的方式，将整个样本最真实地保存下来，无需任何后续拼接和加工。此外，逐点扫描保证采集样本信息时所有的激发光都保持同一水平，不存在因光强不一致导致的结果失真，无需阴影校正，保证后续分析结果准确。(图2)
图2 （A）传统扫片原理（左）与InnoQuant扫片原理（右） （B）百合花切片扫描结果比较：传统扫片装置（左）与InnoQuant扫描结果（右）
3.4色同时扫描
InnoQuant内置4组独立激光光源和PMT检测器，每个PMT最多可安装7个滤光片，不但兼容常用荧光染料，还可根据用户需求定制。此外，4个检测通道可同时工作，一张4荧光染料标记的标准玻片（26mm*76mm），在17min内完成扫描，而共聚焦显微镜则需要数个小时，InnoQuant扫描速度更快。
总结
作为一款最新推出产品，InnoQuant凭借其独特的工作原理，强有力的硬件配置，已成为满足广大科研工作者免疫荧光染色的强有力的助手。
Innopsys 成立于1999年。总部位于法国，一直致力于生物医学领域相关仪器和软件的自主研发和生产。InnoQuant组织切片/生物芯片扫描仪，采用先进的共聚焦PMT检测器和多激光扫描光路，可以同时进行多通道荧光检测。不仅扫描结果清晰，而且无需后续拼接和阴影校正处理，在组织切片和生物芯片扫描领域都有广泛应用。
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