ELISA试剂盒包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。但操作中的各个环节对试验的检查作用影响较大,如不留意,有也许致使显色不全、花板等成果。
下面将操作中各个环节常出现疑问解决办法总结如下:试剂要选择质量优秀的检查试剂,严厉依照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。标本收集与保留:防止运用肉眼可见的溶血标本、高脂标本和混浊标本;2-8℃下,标本可放置24-48小时,长时间保留需放置-20℃下,请防止重复冻融。
ELISA试剂盒详细请参照:
1.洗涤液:用前制造,有的试剂盒会标明,配好的4度下一般能够放一个月,假如没有标明,尽量用新鲜的,不要多制造;
2.显色液(有A液和B液的),用前15分钟制造;
3.规范品:有的试剂盒中规范品是现已制造好的,4度保留,有的是要现制造的,依照说明书操作;
4.浓缩生物素联系的二抗和HRP:假如需求制造,试剂盒没注明配好能够保留多久的话,尽量现配现用(用前15分钟制造);原则是试剂盒上没有指出制造物的贮藏方式的话,应当现配现用;不要怕麻烦;还有小瓶的管子开盖前要离心,ELISA试剂盒避免盖子上粘连今后总量不行;
5.加样:室温温育的试剂,格外是温育时间比较短的试验操作的试剂,加样对数据的影响比较大,格外要留意加样疑问。
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