抗体结构和用于噬菌体展示的重组形式

上海研生实业有限公司

2015/06/26 16:02

总体上，可以构建两大类抗体文库：免疫文库或天然文库。免疫文库是用免疫球蛋白（Ig）可变区（V）基因制备而成的，这些基因或来自免疫人群，或来自小鼠；其中的V基因高度偏向于能识别免疫原的抗体。因而，免疫文库中分离的抗体亲和力，远高于那些分离自同等规模天然文库的抗体。这些抗体文库同样可用来选择针对非免疫抗原的抗体。天然文库的构建意图是让抗体文库没有偏好性，从而可以从中选择到针对各种各样抗原的抗体。它们或来自天然的未免疫人体的重排V基因，或来自合成的人V基因。总体而言，所选择抗体的亲和力与相应的抗体文库容量是成比例的；其Kde值在较小抗体文库的10-6～10-9mol/L到较大抗体文库的10-9mol/L之间。这一发现与理论推测是一致的。

对天然V基囱抗体文库和合成的V基因抗体文库进行比较可以发现：天然V基因文库与同样规模的合成V基因抗体文库相比，可产生具有更高亲和力的抗体。这也许是由于合成文库中所采用的互补决定区域（CDR）残基不能为抗体结构所接受，或是由于产生了不能以高亲和力结合的抗体结构。采用聚合酶链反应（PCR）以此方法制备合成行V区基因，同样可导致在可变区出现框移和终止密码子。要解决此问题，可以用三核苷酸替代单碱基来合成寡核苷酸，尽管此项技术成本高昂且未广泛普及。

被展示的重组抗体的基因结构。

构建于pⅢ上的以噬菌粒为基础的scFv抗体文库。实际上，与肽库不同，所有抗体文库都是在噬菌粒载体中构建的。随后的载体优化包括六组氨酸标签的出现和表位标签替换，都未从根本上改变这个载体的性质。使用噬菌粒载体的原因有两点：首先，噬菌粒载体具有比噬菌体载体更高的转化效率，因此可以构建明显大很多的抗体文库；其次，噬菌粒展示基本上都是抗体片段的单价展示，这样就允许依据结合常数对抗体进行更高的选择。采用噬菌粒载体必须用辅助噬菌体进行噬菌体救援，辅助噬菌体可以反式提供其他的噬菌体蛋白。

pHENl噬菌体展示载体。

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