为什么选择ELISA试剂盒?
以TNF-a为例,Meso Scale Discovery? Vplex电化学发光试剂盒以0.04pg/mL的灵敏度是普通ELISA(7 pg/mL左右)的100多倍。如果实验样本中的TNF-a低于7pg/mL,这就意味着实验数据会无法检测,实验没有定量结论。另外一个案例,临床常规测定普通CRP的方法检测线性一般为3~200mg/L,而预测心血管事需要更高灵敏度的CRP,超敏或高敏CRP (hs-CRP)。
ELISA试剂盒检测什么样本?试验周期多长?
1. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
2. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
3. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
如实验研究周期较长,ELISA试剂盒尽量选择一个批次的,以防止不同批次间的差异。然而由于普通ELISA有效期在3-12个月,而实验周期往往在1-2年以上,一些长期临床实验项目甚至在5-10年,因而经常面临不同批次的挑战。而Meso Scale Discovery?Vplex试剂盒经过54个月稳定性测试。
化学试剂的保存方法
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ELISA试剂盒检测的成份
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