细菌中蛋白质的提取与纯化技术说明
采用T7? Tag Affinity Purification Kit
T7?Tag抗体琼脂。B/W缓冲液:4.29mM Na2HPO4,1.47 mM KH2PO4,2.7 mM KCl, 0.137mM NaCl,1%吐温-20,pH7.3 洗脱缓冲液: 0.1M柠檬酸,pH2.2. 中和缓冲液:2M Tris,pH10.4。 PEG 20000。
实验步骤:
1.100ml 含重组表达质粒的菌体诱导后,离心5000g×5min,弃上清,收获菌体,用10ml预冷的B/W缓冲液重悬。
2. 重悬液于冰上超声处理,直至样品不再粘稠,4℃离心 14000g×30min,取上清液,0.45μm膜抽滤后作为样品液。
3. 将结合T7?Tag抗体的琼脂充分悬起,平衡至室温,装入层析柱中。
4. B/W缓冲液平衡后样品液过柱。
5. 10ml B/W缓冲液过柱,洗去未结合蛋白。
6. 用5ml洗脱缓冲液过柱,每次1ml,洗脱液用含150μl中和缓冲液的离心管收集,混匀后置于冰上,直接SDS-PAGE分析。
7. 将洗脱下来的蛋白放入透析袋中,双蒸水透析24hr,中间换液数次。
8. 用PEG 20000浓缩蛋白。
大鼠ELISA试剂盒注意事项:
蛋白在过层析柱前,要0.45μm膜抽滤,否则几次纯化后,柱子中会有不溶物。
北京艾然生物科技有限公司是一家集科研、生产、营销于一体的现代化股份制高科技企业。致力于各种生物试剂、细胞周期检测试剂盒、高保真KOD试剂盒、抗原、血清、单克隆抗体、多克隆抗体、酶联免疫试剂盒等多种生化试剂的研究。并可为您提供elisa试验、免疫组化试验、W.B试验等技术服务。我们本着以诚信为本,服务至上为经营理念,为每位热爱科学的人们提供一个更好、更放心、更方便的服务平台,竭我们的全力为您服务!
化学试剂的保存方法
化学试剂的保存方法
化学试剂的保存方法
ELISA试剂盒检测的成份
相关产品
炭疽热毒素受体2(ANTXR2)酶联免疫分析试剂盒
碳分解代谢物阻遏4样蛋白(CCRN4L)酶联免疫分析试剂盒
碳酸酐酶Ⅰ(CA1)酶联免疫分析试剂盒
碳酸酐酶Ⅱ(CA2)酶联免疫分析试剂盒
碳酸酐酶Ⅲ(CA3)酶联免疫分析试剂盒
碳酸酐酶Ⅳ(CA4)酶联免疫分析试剂盒
碳酸酐酶ⅤB(CA5B)酶联免疫分析试剂盒
碳酸酐酶Ⅵ(CA6)酶联免疫分析试剂盒
碳酸酐酶Ⅸ(CA9)酶联免疫分析试剂盒
碳酸酐酶Ⅻ(CA12)酶联免疫分析试剂盒
羰基还原酶1(CBR1)酶联免疫分析试剂盒
羰基还原酶3(CBR3)酶联免疫分析试剂盒
羰基还原酶4(CBR4)酶联免疫分析试剂盒
糖蛋白Ⅴ(GP5)酶联免疫分析试剂盒
糖蛋白A33(GPA33)酶联免疫分析试剂盒
关注
拨打电话
留言咨询