ELISA抗原竞争法检测sIL-2R含量的操作流程

2015-04-28 15:57  下载量:3

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本法是用纯化或重组的IL-2R(α链,P55,CD25,Tac抗原)蛋白包被96孔酶标反应板,同时加入已知量的抗IL-2RMcAb,再分别加入sIL-2R标准品与待测样品。则待测sIL-2R或者sIL-2R标准品与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白竞争与抗IL-2R McAb结合。通过与标准品对照,从抗IL-2R McAb与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白结合受抑制程度来求得待测样品中sIL-2R含量。【操作步骤】 (1) 以一定浓度的纯化或重组的IL-2R(P55)蛋白包被96孔酶标板,100ul/孔,4℃过夜(16-72h); (2) 弃包被液,用1%BSA-PBS封闭非特异性结合位点,200ul/孔,置室温2h; (3) 用洗涤液加满各孔置3min,然后倾去,反复洗涤3次; (4) 分别加入不同稀释度的sIL-2R标准品及待测样品,50μl/孔; (5) 各孔均加入FITC标记的IL-2R McAb,50μl/孔,充分混匀后置室温2h; (6) 同上洗涤3次; (7) 各孔均加入碱性磷酶酶标记的兔抗FITC抗体,100μl/孔,置室温1h; (8) 同上洗涤3次; (9) 各孔均加入底物液,100μl/孔,置室温15-30min; (10) 用酶标仪以波长405nm测各孔OD值。

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