ELISA试剂盒做标准曲线样品检测时需要注意:
1)设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度,2)即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限,而对于呈S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段,即曲线几乎成直线的范围内。
3)样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。
3)用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
4)检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。
5)标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。
6)做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.98,对于有些实验,至少要0.99甚至是0.999。
ELISA试剂盒进行各项实验条件的选择包括:
(1)固相载体的选择:不管何种载体,在使用前均可进行筛选,用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间,吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时,
(3)酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份),然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4)酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。
ELISA试剂盒为广大科研用户提供各种高品质的试剂和服务,如细胞、血清、Elisa试剂盒、质粒提取试剂盒、DNA产物纯化试剂盒、RNA提取试剂盒、PCR等产品,针对以上各项服务,均有丰富服务经验和深厚专业背景的人员团队为您提供技术服务和支持。
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ELISA优缺点比较
试剂盒组分都是安稳的
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