超敏反应的免疫检测,一、过敏原皮肤试验(skin test)
皮肤试验是在皮肤进行的体内免疫学试验,简称皮试。
(一)皮肤试验原理
1.I型超敏反应皮肤试验原理
当变应原通过皮肤挑刺、划痕、皮内注射等途径进入致敏者皮肤时, 与吸附在肥大细胞和嗜碱粒细胞上的IgE特异性结合,导致肥大细胞或嗜碱 粒细胞脱颗粒,释放生物活性介质。在20~30分钟内局部皮肤出现红晕、 红斑、风团以及瘙痒感,数小时后消失。出现此现象者判断为皮试阳性, 即对变应原过敏;未出现红晕、红斑、风团者为阴性,即对该变应原不过 敏。
最常用的部位是前臂曲侧或上臂伸侧,因这些部位的皮肤较光滑细 腻,且便于实验操作与结果观察。
2.Ⅳ型超敏反应皮肤试验原理
用皮内注射、皮肤斑贴等方法使用变应原进入已致敏机体,体内致敏 的T细胞再次接触到变应原后,释放多种细胞因子,造成局部以单核细胞和 淋巴细胞浸润为主的炎症反应。24~48小时后局部出现红肿、硬结或水泡, 以此来判断变应原是否引起机体Ⅳ型超敏反应或机体的细胞免疫功能状 态。
(二)方法
1.皮内试验(illtracutaneous test)
(1)I型超敏反应的皮内试验:消毒后,将试验用变应原提取液注入皮 内,一般注射前臂内侧皮肤。若同时作多种变应原皮试时,相互间隔应为 2.5~5 cm(高度可疑敏感的变应原应选择5 cm),以免强烈反应时混淆结 果。反应须观察15--20分钟,根据风团、红晕大小判定结果。
出现假阳性的常见原因有①皮试液不纯,含有非特异性刺激物;②患 者皮肤反应过强,如患者皮肤划痕症阳性;③操作者手法较重,注射量较 大或浓度过多、注入少量空气等。出现假阴性的常见原因有①皮试液抗原 性低或失效;②患者皮肤反应性差如老年人,或过敏性休克或哮喘大发作 后的一段时间;③皮试前使用过抗组胺药物或免疫抑制剂等。
(2)Ⅳ型超敏反应的皮内试验:结核菌素皮试是检测Ⅳ型超敏反应典型 的例子。OT试验既可用于了解个体对结核菌素是否有免疫力及B03接种后效 果观察,又可了解个体细胞免疫功能状况。
试验抗原用旧结核菌素1:2 000 0.1 ml(含5IU-国际结核菌素单位) 或结核杆菌纯蛋白衍生物O.1Ⅱ11(含0.1 rag结核蛋白),前臂内侧皮内 注射,48--72小时后观察局部有无红肿、硬结。
2.挑刺试验(prick test)
也称点刺试验。主要用于检测I型超敏反应,其原理同皮试。先将点刺 皮试液滴在皮试处(如前臂曲侧),然后用点刺针穿过液滴,刺入皮肤,以 刺破皮肤而不出血为度,试验即告完成。15分钟后观察结果。点刺试验用 皮试液的浓度应是皮内试验液浓度的10~100倍或更多,作为阳性对照的磷 酸组胺浓度也应相应增加(国内l rag/ml,国外用浓度更高)。
3.斑贴试验(patch test)
主要用于寻找引起接触性皮炎的过敏原。试验是将可疑过敏原直接贴 敷于皮肤表面,涂敷范围为0.5~1 ClTI为宜。如试验抗原为软膏时可直 接涂抹在皮肤上;如为固体物时则可用蒸馏水混匀浸湿后涂敷于皮肤上; 如为液体则浸湿纱布后敷贴于皮肤上。涂敷后盖以玻璃纸或油纸,再用纱 布或绷带固定,如有不适可随时打开查看、处理。48~72小时后观察局部 有无红肿和水疱。斑贴试验用于Ⅳ型超敏反应的检测,敏感度虽不太高, 但假阳性较少,结果的可信度大。
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