1 简介
DEAE-纤维素,它采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物,表面又用大分子糖链接枝,使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性,它在高流水下保持更高载量,同时又具有更好的分辨率。由于比表面积大,平衡和洗脱的时间也更短。它经过接枝即使是纯化病毒,质粒等超大分子的物质,载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好,使用寿命长,操作方便。
2 填料特征:
特点
载量大,分辨率好,流速高,使用方便。
基质
高度交联纤维素
配基
二乙基氨基乙基
配基密度
40μmol /ml
吸附载量
180mg HSA/ml
填料的颗粒大小
50μm
最大流速
7500px/h
pH范围
3-10,在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性
各种缓冲液及盐,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M盐酸胍,乙醇,异丙醇等
物理稳定性
0.1M中性缓冲液中,120℃30min
保存温度
+4~30℃
保存
干粉,1g=3-4ml
3 应用的注意事项:
3.1 色谱柱装填
(1)所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体最好做脱气处理。填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。
(2)在柱子下端加入20%乙醇,以除去柱子中的空气,关闭柱子出口,在柱内保留少量的20%乙醇。20%乙醇容易产生气泡,可以在里面加1%吐温避免气泡产生。也可以换成纯水装柱子,但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水,具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行,也可以小心倾去填料上的20%乙醇,再换成5倍体积的纯水,反复沉淀去上清,5次左右就可以用于装柱子。
(3)此填料颗粒比较细,所以一定要注意柱子要选择合适的筛网,不能漏,也可以取点填料加到筛网上试试,如果没有问题再将填料连续倒入柱子时,要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流,以减少气泡的产生,让填料先自然沉降到填料体积不再变化,而填料和上面的液体很好分层,上层溶液完全澄清,就可以开泵用适当的流速压柱子,填料体积不再变化后,再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于装柱子的流速。
(4)在装柱子前,填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时,这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
3.2 蛋白的结合
样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致,盐浓度过高或者pH带低也许挂不上,所以要根据自己的样品做适当调整。
3.3 蛋白的洗脱
这个填料如果采用线性梯度洗脱,柱子的直径和高度比最好是大于10,数值越大越有利于分离,而且样品最好别上太多,可以按约10mg/ml上样,如果采用阶段洗脱的方法,装短粗柱子就可以,上样量也没有限制。阶段洗脱容易放大,重复性好,如果洗脱条件好完全可以得到和线性梯度一样或者更好。采用什么方法完全根据自己需要。
4 再生清洗
(1)每次用完最好用0.5MNaOH含2M NaCl洗 5个床体积,再用水洗5个柱床体积,然后用20%乙醇保存,使用3-5次后在水洗之后再用70%的乙醇或30%异丙醇都含1%吐温洗5个柱床体积,最后20%的乙醇流洗5个柱床体积。
(2)有机溶剂和水混合很容易产生气泡,为了避免这样情况,可以把配好的有机溶剂在室温放置过夜,再使用,这样可以避免气泡进柱子而导致柱子不能正常使用。
5 保存
在20%乙醇中,4℃下长期保存。
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