方案摘要
方案下载应用领域 | 生物产业 |
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参考标准 | 文献 |
Western Blotting 操作步骤 一、Western Blotting 实验步骤概述1、 组织取材:组织块称重 2、利用液氮、研钵粉碎组织块 3、加入RIPA缓冲液(每克组织3ml RIPA),PMSF(每克组织30μl,10 mg/ml PMSF),利用Polytron进一步匀浆(15,000转/分*1分钟)维持4℃ 4、加入PMSF(每克组织30μl,10 mg/ml PMSF),冰上孵育30分钟 5、移入离心管4℃,约20,000g(约15,000转)15分钟 6、上清液为细胞裂解液可分装-20℃保存 7、进行Bradford比色法测定蛋白质浓度 8、取相同质量的细胞裂解液(体积*蛋白质浓度),并加等体积的2×电泳加样缓冲液 9、沸水浴中3分钟 10上样 11、电泳(浓缩胶20mA,分离胶35mA) 12、电转膜仪转膜(100mA 40分钟) 13、膜用丽春红染色,胶用考马斯亮蓝染色 14、Westernblot 试剂盒显色 15、分析比较记录
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