方案摘要
方案下载应用领域 | 生物产业 |
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Western Blotting 常见问题解答 1、胶片上存在反转印象(如:亮的条带、黑的背景)?原因:HRP的浓度过高; 解决:稀释HRP至少10倍。 2、膜上有黄色或棕色的沉积?原因:HRP的浓度过高; 解决:稀释HRP至少10倍。 3、在暗室中条带过于明亮?原因:HRP的浓度过高; 解决:稀释HRP至少10倍。 4、条带的发光时间持续了至少8小时?原因:HRP的浓度过高; 解决:稀释HRP至少10倍。 5、信号太弱或没有?原因: 1.太多的HRP积聚导致信号快速的消退; 2.抗原或抗体的浓度不够; 3.转印不成功; 4.HRP或其他底物的效价降低。 解决: 1.稀释HRP至少10倍; 2.增加其浓度; 3.寻找合适的转移方法和条件; 4.选择其他的合适底物。 6、背景高?原因: 1.HRP浓度过高; 2.封闭无效; 3.不适合的封闭试剂; 4.洗涤不充分和洗涤液的量; 5.胶片曝光过度; 6.抗原或抗体的浓度太高。 解决: 1.稀释HRP至少10倍; 2.寻找合适的封闭方法; 3.选用其他的封闭试剂; 4.增加洗涤的时间,次数; 5.减少曝光时间; 6.稀释抗原或抗体。 7、蛋白质条带上有空泡影像?原因: 1.蛋白质没有被充分转印; 2.膜没有预先浸湿; 3.在胶片和膜之间有气泡。 解决: 1.寻找合适的转移方法和条件; 2.在转印前充分浸湿; 3.在暴光之前赶走气泡。 8、胶片上背景弥散?原因:HRP标记的抗体出现了积聚; 解决:稀释HRP至少10倍。 9、无特异性条带?原因: 1.HRP浓度过高; 2.SDS促使非特异蛋白质条带黏附在目的蛋白质条带上。 解决: 1.稀释HRP至少10倍; 2.在操作过程中不要加SDS。
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