方案摘要
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葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)操作说明 产品组成: 试剂(A): G-6-Pase 孵育液 50ml 4℃ 避光 试剂(B): ALP 硫化溶液 2×1ml RT 避光 试剂(C): 中性福尔马林 50ml 4℃ 避光 试剂(D): G-6-Pase 对照液 10ml 4℃ 避光 使用说明书 1 份 产品简介: 葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6 –phosphatase,G-6-Pase)是一种多存在于哺乳类动物肝、肾、肠等组织的膜结合酶,G-6-Pase 和微体紧密结合,定位于内质网,是内质网的主要标志酶,能把葡萄糖-6-磷酸水解成葡萄糖和磷酸。G-6-Pase 对维持血糖浓度的相对恒定有至关重要的作用,是糖代谢的关键酶。当血糖降低时,G-6-Pase 促进肝糖原转变为血糖。当缺乏G-6-Pase 时,会引起糖原分解障碍,使糖原积累在肝、肾、心脏等部位,导致肝糖原储积病。G-6-Pase 最适pH 为6.5,在pH6.0~8.0 亦可,pH8.0 最稳定,pH5.0易变性。组织化学反应多用pH6.5~6.7。 葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)采用重金属捕捉剂和磷酸结合显示酶的活性。该酶对固定很敏感,组织经80%乙酸溶液固定后用石蜡包埋,G-6-Pase 完全被抑制。需用新鲜组织低温恒冷切片,经甲醛短时固定酶即失活,但可短时低温丙酮固定,但一般不固定。 操作步骤(仅供参考): 1、冰冻切片入蒸馏水清洗。 2、入G-6-Pase 孵育液,37℃孵育15~20min。 3、自来水冲洗后,蒸馏水冲洗。 4、在上述过程中配制ALP 硫化工作液,即取试剂(B)用蒸馏水稀释50 倍, 即为ALP 硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育1min。 5、自来水水洗3~5min。 6、(可选)入中性福尔马林,固定2min。 7、入蒸馏水水洗2 次。 8、甘油明胶封片
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