方案摘要
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猪脑心肌炎病毒抗体(EMCV-Ab)试剂盒定性实验方法 操作步骤: 1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀, 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4.配液:将30(48T 的20 倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml 后备用 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 9.显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟 10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。 结果判定: 试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10 临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定:样品OD 值< 临界值(CUT OFF)者为猪脑心肌炎病毒抗体(EMCV-Ab)阴性 阳性判定:样品OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为猪脑心肌炎病毒抗体(EMCV-Ab)阳性 注意事项 1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。 2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 5.底物请避光保存。 6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm 7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M 的硫酸,使用时必须注意安全。 保存条件及有效期 1.试剂盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6 个月
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