其他理化性质>粒径检测 | AccuSizer 颗粒计数器用于蛋白质配方筛选和 USP 测试-上海奥法美嘉生物科技有限公司

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AccuSizer® 自动颗粒计数分析仪可用于蛋白质配方优化，最大程度地减少蛋白质聚集并执行 USP 亚可见颗粒物质测试。

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配置单

美国PSS AccuSizer A9000 FXnano 高浓度颗粒计数器
型号：AccuSizer A9000 FXnano

¥130万 - 150万
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方案详情

1. 引言

动态光散射 (DLS) 是检测蛋白质粒径的标准工具，但该方法不提供浓度信息。AccuSizer® 单粒子光学传感技术 (SPOS) 系统可用于检测聚集蛋白粒径和浓度，可测量150nm以上的聚集蛋白浓度。图 1 显示了单抗产品热应激前后的 Nicomp® DLS 结果。

加热后的结果（蓝色）显示了高分辨率的多峰结果，包括从~150 nm开始的较大的聚集峰。AccuSizer 无法检测到 10 nm 的颗粒，但可以提供 >150 nm聚集蛋白的定量数据。在这项研究中，AccuSizer FX Nano 用于研究各种配方稳定化学物质如何影响NIST标准蛋白质的最终聚集状态。AccuSizer FX Nano也可用于 USP<787>亚可见颗粒物测试¹。

2. 材料

使用的蛋白质是 NIST 标准物质 8671，批号 14HB-D002，NIST mAb，人源 IgG1k 单抗²。在Nicomp动态光散射(DLS)系统上，使用35mw激光二极管源，APD检测器测量蛋白质的初次粒径。在配备两个传感器的AccuSizer FX Nano SIS系统上测量蛋白质聚集体:LE-400; 0.5 – 400 μm 和 FX Nano; 0.15 – 10 μm.SIS进样器提供精确的样品体积，最小进样量低至100 μL且可回收。

iFormulate³（图 2）板预装了配方，由 DoE 设计用于合理的配方开发，用于测试配方的聚集水平。评估了蛋白配方的四个主要影响因素；pH、离子强度、缓冲液和稳定剂浓度。

使用的 iFormulate 板测试了以下影响因素：

• pH：5 – 7.6

• 离子强度：0 – 200 mM NaCl

• 海藻糖稳定剂：0 – 10 %

• 缓冲液浓度：10 – 50 mM

3. 方法

将 NIST mAb 解冻并稀释至 1 mg/mL，将 160 μL 过滤的去离子水添加到 iFormulate 板的每个孔中。每孔加入40 μL NIST mAb。将培养皿置于60°C(刚好低于蛋白质熔点)的烤箱中24小时。使用 AccuSizer 颗粒计数器分析每个孔。将>0.15 μm(总)和>0.53 μm的颗粒计数数据提交给iformula，由iformula进行数据分析和稳定性建模。

4. 结果

数据使用帕累托分析方法处理，帕累托分析方法在多影响因素下十分有效。帕累托分析给出了影响因素排名和影响因素之间的相互作用。图 3 和图 4 分别显示了 >0.15 μm 和 >0.53 μm 的帕累托分析。颜色表示配方变量对增加的颗粒计数的相对重要性，蓝色 = 重要，灰色 = 临界，红色 = 不太重要。