MALDI-TOF 质谱技术快速检测法布瑞氏症生物标志物在患者尿液中的变化

法布瑞氏症 (Fabry disease) 是因Ｘ染色体出现缺陷而引起的遗传疾病，主要是因体内制造α-半乳糖甘酵素的基因发生缺陷，无法代谢的脂质堆积在各种器官内，进而引发心脏、肾脏、脑血管及神经等病变。已有研究证明酰基鞘鞍醇三己糖 (Gb3) 及其异构体和类似物是能够反映法布瑞氏症的严重程度和治疗效果生物标志物。本文研究报道，英国Birmingham大学的研究人员应用MALDI-TOF质谱技术，建立了快速定量测定布瑞氏症患者尿液中Gb3类生物标志物的方法。

研究人员收集了15位法布瑞氏症患者和21位健康对照者的尿样。取100uL尿液，分别加入相同体积的甲醇和氯仿，其中甲醇溶液中含有内标物十七酰神经酰胺三己糖苷，水浴超声5分钟，离心。取1uL氯仿层，点置MALDI靶板，晾干，添加1uL 2-巯基-5-氯苯并噻唑基质液。Bruker ultraflextreme MALDI-TOF质谱测定数据如下图。

采用MALDI-TOF/TOF质谱技术，进一步确认4个高丰度Gb3峰之后。Gb3总面积，计算尿液中Gb3总量：

尿液中Gb3总浓度按内标定量法计算，Gb3总峰面积与内标峰面积的比值与尿液中Gb3总浓度呈现良好的线性关系 (y=0.7229x, R2=0.999)。

最低检测限 (LOD) 0.15 ng/μL，最低定量限 (LOQ) 0.30 ng/μL；日内与日间重现性 (CV) 分别为9.9% 和13.7%。Gb3在患者尿液中的总浓度明显高于健康对照组 (p< 0.0001)，其中男性尿液中的Gb3水平要高于女性 (p= 0.08)。该方法不仅灵敏高，重现性好，结果置信度高，而且方法简单快速，从尿液到结果仅需15分钟。

已有报道LC-MS/MS技术检测尿液中的Gb3，但是样品前处理复杂耗时，方法灵敏度欠佳。本研究创新性的方法，将液-液提取方法与MALFI-TOF质谱技术相结合，大大简化样品制备的步骤，减少样品测定的时间。凡是具有MALDI-TOF质谱仪的实验室，都可以很容易的对法布瑞氏症进行无创伤和低成本的检测。

摘自文献：Novel Rapid MALDI-TOF-MS-Based Method for Measuring Urinary Globotriaosylceramide in Fabry Patients. J Am Soc Mass Spectrom (2016) 27:719-725

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