要用AnnexinV双染法测凋亡,又想同时标记蛋白marker,甚至还有胞内指标,可是PI和7-AAD都不能洗,怎么办? eBioscience的可固定细胞活力染料Fixable Viability Dye帮您完美解决 固定、破膜以及洗涤步骤不影响Fixable Viability Dye的染色,而PI、7-AAD的染色通常是放在其他抗体孵育完成后进行,不能洗涤即要上机检测;对于胞内抗体的染色,由于经过了固定步骤,经过PI或7-AAD染色后所有的细胞都是阳性,所以他们只适合于胞膜染色的死活细胞鉴定 | ||
◎ Annexin V Apoptosis Detection kit (Cat. No. 88-8007, 88-8006, 88-8005, 88-8102, or 88-8008) | ||
1. 用蒸馏水稀释 10X Binding Buffer 至 1X ; 2. 标记表面marker; 3. 用不含叠氮钠及血清的PBS洗细胞两次; 4. 在不含叠氮钠及血清的PBS按1-10x106 cells/mL 的浓度重悬细胞; 5. 每1mL细胞中加入 1 μL of Fixable Viability Dye并立即涡旋混匀; 6. 2-8°C避光孵育30分钟; 7. 孵育完成后,务必用含蛋白的缓冲液,如Flow Cytometry Staining Buffer洗两次细胞; 8. 用1X Binding Buffer洗一次细胞; 9. 在1X Binding Buffer中按1-5x106 cells/mL浓度重悬细胞; 10. 100 μL细胞悬液中加入5 μL荧光标记的Annexin V; 11. 室温避光孵育10-15分钟; 12. 用1X Binding Buffer洗细胞一次; 13. 固定破膜,用破膜缓冲液洗细胞; 14. 进行胞内marker的标记; 15. 完成后上机分析。 更多关于Fixable Viability Dye的介绍,请看链接: | ||
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