Life Technologies细胞示踪产品（一）

Molecular Probes® 荧光细胞追踪剂和神经示踪剂是用于跟踪复杂环境中细胞的重要工具，已广泛应用于细胞迁移、创伤愈合及干细胞分化研究。这些探针在工作浓度下稳定无毒，可在细胞内保留完好(从几小时到几天)，并在生理pH值下发出亮荧光。

此外，Life Technologies可提供覆盖光谱的各种荧光发射光颜色，能够同时检测细胞运动及其他重要的细胞功能。更多详情，请登录 lifetechnologies.com/celltracing。

表 1. Molecular Probes® 荧光细胞追踪探针和示踪剂。

一、 钙黄绿素 AM 探针

传统的非固定钙黄绿素探针是适用于细胞示踪和活性研究的示踪剂。这些示踪剂含有可阻断分子上负电荷的乙酰氧基甲酯(AM)基团，便于其穿过细胞膜。进入细胞后，非特异性的酯酶会切掉AM，生成细胞非透过性的极性分子，高效保留在细胞内数小时。与下述的 CellTracker?和 CellTrace?探针不同，钙黄绿素AM探针只能保留在活细胞内。当与细胞非透过性的核酸染料(如SYTOX® Green染料或PI) 结合使用时，钙黄绿素示踪剂可利用显微镜或流式细胞仪高效区分活细胞和死细胞。钙黄绿素探针易于操作，有效时间为2-8 小时，具体取决于细胞类型。

图1 Jurkat细胞染色绿色荧光的calcein AM、CellTrace? calcein red-orange AM或calcein blue AM。标记后的细胞混在一起，并用合适的滤光片成像。

二、 CellTracker? 探针

CellTracker? 荧光探针可自由通过细胞膜，转变为细胞非透过性的反应产物。这种细胞非透过性质可在细胞中存留多代，但不会转移至群体中相邻的细胞内。导入CellTracker?探针的细胞通常可发出荧光，至少24小时内均可观察到，因此，这些探针是极佳的长期细胞示踪剂。此外，采用甲醛或戊二醛可固定染色形态，长期保存标记细胞或组织，有利于潜在的病原体样本的安全处理，且与抗染料抗体结合使用时，可实现信号放大。CellTracker?探针不会转移至群体中相邻的细胞内，是适用于移植细胞或组织的长期示踪剂。通常采用荧光显微镜监测 CellTracker?探针的信号，探针有多种荧光颜色可供选择，适用于多色分析。

图2 采用 CellTracker? Green CMFDA进行创伤愈合分析。 (左)培养72小时后，采用CellTracker? Green CMFDA 染色人皮肤新生成纤维细胞的细胞单层。(中)对染色的细胞单层进行划痕试验，放置24小时待愈合。细胞会重新进入伤口，但密度低于对照反应板。(右)对染色的细胞单层进行划痕试验，然后采用0.1 μM细胞松弛素D处理24小时，破坏肌动蛋白聚合，从而使创伤位置不愈合。

三、 CellTrace? 探针

CellTrace?探针亦可极好地保留在细胞内，一旦它们与蛋白质或其他含有胺基的生物分子反应，经甲醛固定后，仍可存留在细胞内。这些胺基反应性细胞示踪剂——包括CellTrace? Violet、CellTrace? CFSE和 CellTrace? Far-Red DDAO-SET探针——均含有琥珀酰亚胺酯，可与细胞内外的伯胺反应。采用CellTrace? Violet探针染色明亮均匀，群体中细胞间的荧光差异极小，可在荧光直方图上观察增殖细胞的不同代数。

四、 Qtracker® 探针

Qtracker®细胞标记试剂盒——提供七种颜色的Qdot®纳米晶体——包含将Qdot®纳米晶体导入活细胞所需的试剂，为长期实时追踪研究提供了一种高效的方法。这些Qdot®纳米晶体含有一种目标多肽，可被细胞选择性地摄取，分布于整个细胞质的囊泡内。

在细胞内，Qdot®纳米晶体可发出光稳定性的强荧光，在连续照明下可观察到，且不会因光漂白作用或降解而消失。在复杂的细胞环境以及不同的生物学状态下(包括细胞内pH 值、温度和代谢活性的改变)均能保持荧光，且可以传递至子代细胞内，至少7代，或者维持至少8天(U2OS细胞)。Qtracker®细胞标记试剂盒可用于各种应用领域，包括造血干细胞的体内追踪、注入神经移植物后Schwann细胞的追踪以及感染的皮肤创伤内的中性粒细胞存活检测。在小动物的体内血管成像应用中，可将Qtracker®非靶向量子点注射至小鼠的尾静脉，利用小动物体内成像(SAIVI?)技术进行血管结构研究。这些纳米晶体可发出强荧光，并出现发射光红移，使组织穿透性增加，消除本底自发荧光，PEG表面包覆可使非特异性反应最小化，降低免疫应答反应。由于 PEG 表面包覆不含反应性功能基团，因此Qtracker®非靶向量子点可以更长时间保留在循环系统内，一次注射的成像时间达3小时，多次注射则可维持更长时间。

图3 Qtracker® 探针。(A) Qtracker® 625。(B) 三色Qtracker® 细胞标记，采用Qtracker® 565、655和705 分别标记3T3 (绿色)、HeLa (红色)和U188 (白色) 细胞。(C) 采用Qtracker®血管标记物标记血管。

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