PA317 逆转录病毒包被的NIH3T3细胞

PA317  逆转录病毒包被的NIH3T3细胞 

【细胞英文缩写】PA317

【细胞中文名】逆转录病毒包被的NIH3T3细胞

【种属来源】小鼠 

【组织来源】胚胎 

【形态】成纤维细胞 

【培养基】含1.5g/L 碳酸氢钠， 4.5g/L 葡萄糖， 4mM L-谷氨酰胺的DMEM，90%；胎牛血清或新生牛血清，10%。 

【背景资料】 PA317细胞株源自TK- NIH/3T3细胞，通过pBR322中的包装结构DNA(pPAM3)和pBR322中的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因共同转染构建而成。 通过感染或转染将逆转录病毒载体导入这些细胞，结果生成可以感染许多哺乳动物细胞的双嗜性载体颗粒。 这株细胞生成的病毒颗粒已成功地用于将基因导入人类。 可能因为用于构建这株细胞而转入的DNA丢失，能够包装逆转录病毒载体的PA317细胞百分比随传代而减少。 在包含0.03 mM 次黄嘌呤, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培养基中短暂(大约5天)选择，可以选出保留了包装功能的细胞。 选择后，细胞应在HT培养基(0.03 mM 次黄嘌呤,0.02 mM 胸苷)中培养4天，以稀释残留的氨甲喋呤。 Cells shipped from the ATCC have been selected in medium containing 0.03 mM hypoxanthine, 0.001 mM amethopterin (methotrexate), and 0.02 mM thymidine prior to freezing, and should be grown in HT medium for 4 days after receipt. 此后细胞不需选择可以稳定至少1个月。  

公司细胞的简洁信息：

（1）储存：液氮。

（2）运输：干冰。

（3）用途：只可用于科研。

（4）第二代培养末期液氮冻存。

（5）PA317  逆转录病毒包被的NIH3T3细胞每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

收到PA317  逆转录病毒包被的NIH3T3细胞后的处理：

1）收到细胞后，首先观察瓶身是否完好（注意有无缝隙，裂痕）。

2）显微镜下观察细胞的生长状况，有无细胞漂浮。

3）用新洁尔灭消毒瓶口及瓶身。

4）打开瓶口，再次用新洁尔灭消毒瓶口（可能会有液体溢出，注意不要碰到液体），酒精灯烤瓶口消毒。

5）将培养液转移至50ml离心管或广口瓶中（若细胞漂浮严重，离心培养基，1000g*5分钟，将离心后的培养基转移至另一个大离心管中，留一点吹打细胞沉淀成悬液，回收细胞至原培养瓶），若漂浮不严重，亦离心一下。

6）在原培养瓶中留一部分原装培养液，再补加自己新配的培养基至适当容积，例如4ml，让细胞适应一下环境。  当细胞长到70-80%，冻存大部分，小部分传代。

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