狗肾细胞，MDCK细胞

狗肾细胞，MDCK细胞    MDCK 贴壁上皮细胞

（1）细胞背景

1958年，S.H. Madin和N.B. Darby从表观正常的成年雌性科克猎犬的肾建立了MDCK细胞株。免疫过氧化物酶染色显示角蛋白阳性。 MDCK细胞系曾被用于研究β淀粉前体蛋白的过程和分选它的水解产物。

（2）客户自备试剂

1）PBS

2）RPMI-1640培养基（不含Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3）0.25% （W/V）胰蛋白酶（含0.02% EDTA）

（3）细胞背景

1）生长方式：贴壁

2）种属：Homo sapiens 狗

（4）培养条件

1）培养基：RPMI-1640培养基（不含Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2）温度：37.0°C

3）气体:空气 95%，CO2 5%

（5）培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml培养液继续培养。

 如果细胞已长满（达80-90%）。即可进行传代，具体步骤如下：

1）弃去培养液，用PBS洗1-2次。

2）向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3）加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4）传代比例：1:2-1:3

（6）常见问题及解决方案

1）培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2）细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

公司细胞的简洁信息：

（1）储存：液氮。

（2）运输：干冰。

（3）用途：只可用于科研。

（4）第二代培养末期液氮冻存。

（5）狗肾细胞，MDCK细胞每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

收到狗肾细胞，MDCK细胞后的处理：

1）收到细胞后，首先观察瓶身是否完好（注意有无缝隙，裂痕）。

2）显微镜下观察细胞的生长状况，有无细胞漂浮。

3）用新洁尔灭消毒瓶口及瓶身。

4）打开瓶口，再次用新洁尔灭消毒瓶口（可能会有液体溢出，注意不要碰到液体），酒精灯烤瓶口消毒。

5）将培养液转移至50ml离心管或广口瓶中（若细胞漂浮严重，离心培养基，1000g*5分钟，将离心后的培养基转移至另一个大离心管中，留一点吹打细胞沉淀成悬液，回收细胞至原培养瓶），若漂浮不严重，亦离心一下。

6）在原培养瓶中留一部分原装培养液，再补加自己新配的培养基至适当容积，例如4ml，让细胞适应一下环境。  当细胞长到70-80%，冻存大部分，小部分传代。

A82136辣根过氧化物酶，英文名或英文缩写：POD，级别：BR，2万u/mg，规格：100克

A82137α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，英文名或英文缩写：α-Galactosidase preparation from green coffee beans，级别：标准品，7万u/mg，规格：5克

A82138乳糖酶，英文名或英文缩写：β-Galactosidase from Escherichia coli，级别：BR，1200u/mg，规格：25克

A82139L-谷氨酸去氢酶，英文名或英文缩写：L-GLDH，级别：BR，45000u/mg，规格：100克

A82140RNA酶，英文名或英文缩写：RNASE，级别：BR，35u/mg，规格：5克

A82141核糖核酸酶H，英文名或英文缩写：Ribonulease H，级别：生物技术级，400u/mg，规格：25克

A82142核糖核酸酶T1，英文名或英文缩写：Rnase T1，级别：BR，10u/mg，规格：100克

A82143RNase&DNase清除剂，英文名或英文缩写：Rnase&Dnase away，级别：BR,0.3-3.0u/mg，规格：500克

A82144去核酸酶试剂，英文名或英文缩写：Nuclease eliminator Wipes，级别：BR，1000u/mg，牛肝提取，规格：5克

A82145去氧细胞核酸酶，英文名或英文缩写：Dnase Ⅰ，级别：BR，1000-5000u/mg,大肠杆菌，规格：25克

A82146，英文名或英文缩写：DNase II，级别：BR，20-40u/mg，杏仁，规格：5克

A82147磷酸肌酸激酶（兔肌），英文名或英文缩写：Creatine phosphokinase(rabbit muscle)，级别：生物技术级，6u/mg，杏仁，规格：25克

A82148黄递酶，英文名或英文缩写：Diaphorase，级别：BR，5000u/g，根霉，规格：100克

A82149葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，英文名或英文缩写：G-6-PD，级别：BR，50u/mg，酵母，规格：500克

A82150磷酸葡萄糖异构酶，英文名或英文缩写：Phosphoglucose isomerase，级别：重组体，125u/mg，酵母，规格：5克

A82151磷酸葡萄糖变位酶，英文名或英文缩写：Phosphoglucomutase，级别：BR，1500u/mg，规格：25克

A82152蚯蚓酶/蚓激酶，英文名或英文缩写：Lumbokinase capsules，级别：高纯，4000u/mg，规格：100克

A82153离析酶R-10，英文名或英文缩写：Macerozyme R-10，级别：BR，30u/mg，芬末，规格：5克

A82154蜗牛酶，英文名或英文缩写：Snailase，级别：BR，300u/mg，悬浮液，规格：25克

A82155蜗牛凝集素，英文名或英文缩写：Snailagglutinin，级别：BR，Ⅰ型，>125CDU/mg，规格：100克

A82156蛋白酶K，英文名或英文缩写：Proteinase K，级别：BR，Ⅱ型，>125CDU/mg，规格：1克

A8215720mg/ml蛋白酶K溶液，英文名或英文缩写：Proteinase K solution，级别：BR，III型，>125CDU/mg，规格：5克

A82158抑肽素，英文名或英文缩写：Pepstatin A，级别：BR，Ⅳ型，≥125CDU/mg，规格：25克

A82159RNA酶抑制剂，英文名或英文缩写：Rnasin Inhibitor，级别：BR，Ⅴ型，>125CDU/mg，规格：5克

A82160胰酶抑制剂，英文名或英文缩写：STI，级别：BR，IA型，>125CDU/mg，规格：25克

A82161蛋白酶抑制剂，英文名或英文缩写：Aprotinin，级别：精制级，650u/mg，规格：100克

A82162AMV逆转录酶，英文名或英文缩写：AMV Reverse transcriptase，级别：BR，400-1000u/mg，规格：5克

A82163MMLV逆转录酶，英文名或英文缩写：M-MLV Reverse transcriptase，级别：USP级，1000u/mg，规格：25克

A82164Super Script Ⅱ阴性逆转录酶，英文名或英文缩写：SuperScript II Reverse Transcriptase，级别：标抗级，RZ＞3,≥300u/mg，规格：100克

A82165碱性磷酸酯酶，英文名或英文缩写：CIAP，级别：BR，RZ＞3,≥300u/mg，规格：5克

A82166脲酶，英文名或英文缩写：Urease(jack bean)，级别：BR，RZ～3,≥250u/mg，规格：25克

A82167亮肽素，英文名或英文缩写：Leupeptin，级别：BR，RZ≥150u/mg，规格：100克

A82168硫代辅酶，英文名或英文缩写：Thio-NAD，级别：BR，9u/mg，规格：5克

A82169β-烟酰铵腺嘌呤二核苷酸，英文名或英文缩写：β-DPN，级别：BR,，250-600u/mg，规格：25克

A82170β-烟酰铵腺嘌呤二核苷酸二钠，英文名或英文缩写：β-DPNH，级别：重组体，500u/mg，规格：100克

A82171还原辅酶Ⅰ抑制剂，英文名或英文缩写：NADH Inhibitor，级别：高纯，60u/mg，规格：5克

A82172β-烟酰铵腺嘌呤二核苷酸磷酸，英文名或英文缩写：TPN，级别：BR，浓度10mg/ml，60u/mg，规格：25克

A82173烟酰铵腺嘌呤二核苷酸磷酸四钠盐，英文名或英文缩写：TPNH2 Na4，级别：BR，2-5 u/ul，规格：100克

A82174癸烯醌，英文名或英文缩写：Coenzyme Q10，级别：BR，1000u/ul，规格：1克

A82175辅酶甲，英文名或英文缩写：COA，级别：BR，规格：5克

A821763C蛋白酶，英文名或英文缩写：3C protease，级别：BR，规格：5克

A82177细胞溶解酶，英文名或英文缩写：Lysing Enzymes，级别：BR，300U/mg，规格：25克

A82178木聚糖酶，英文名或英文缩写：Xylanase，级别：精制级，2000U/mg，规格：100克

A82179维生素C氧化酶，英文名或英文缩写：ASO，狗肾细胞，MDCK细胞级别：BR，300U/mg，规格：1克

A82180醇去氢酶，英文名或英文缩写：Alcohol dehydrogenase，级别：BR，1000u/mg，Type V，规格：5克

A82181崩溃酶，英文名或英文缩写：Driselase，级别：BR，2000-6000U /mg，Type VI，规格：25克

A82182黄嘌呤氧化酶，英文名或英文缩写：XOD，级别：高层析纯，12ku/mg；液体，规格：100克

A82183过氧化物歧化酶，英文名或英文缩写：SOD，级别：BR，150u/mg，Type I，规格：500克

A82184凝血活素，英文名或英文缩写：Thrombin，级别：BR，30u/mg，规格：5毫克

A82185Taq DNA聚合酶，英文名或英文缩写：Taq DNA Polymerase，级别：BR，400u/mg，芬末，规格：5毫克