色谱柱是我们在进行物质分离时常用的器材,那你知道有关于它们的使用、清洗的一些注意事项及正确方法吗?若不以正确的措施去使用,那它们可是很脆弱的哟
硅胶基质分子尺寸排阻色谱柱清洗方法(7.8x30cm)
1.100%纯水以0.2mL/min的流速冲洗1.5小时.
2.如果是疏水性吸附,以20%乙腈水溶液为流动相(用0.45um的有机相滤膜过滤),采用0.2mL/min的流速冲洗1.5小时.
3.100%纯水以0.2mL/min的流速冲洗1.5小时.
4.如果是离子性物质的吸附,以0.1mol/LPB(0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4)缓冲液+0.1mol/LNa2SO4溶液为流动相(用0.45um的水相滤膜过滤),采用0.2 mL/min的流速冲洗1.5小时后,再以0.01g/LPABA(对氨基苯甲酸)为标准品,进样量为20uL,在UV280nm下,以0.1mol/LPB(0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4)缓冲液+0.1mol/LNa2SO4溶液为流动相检测柱效,。
5.如果是碱性物质的吸附,以0.05mol/L的磷酸二氢钠溶液(用磷酸调整pH2.5流动相(用0.45um的水相滤膜过滤),采用0.2mL/min的流速冲洗1.5小时。
6.如果上述处理后仍未能解决问题可能是氢键的吸附,在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或者0.2%-0.3%的中性界面活性剂(Triton、Tween)(用0.45um的水相滤膜过滤)后以0.2mL/min的流速冲洗1.5小时。但需要注意尿素和表面活性剂会在柱中残留。一般不建议此项操作。
7.冲洗完成后,使用0.1mol/LPB(0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4)缓冲液+0.1mol/LNa2SO4溶液为流动相(0.45um水相滤膜过滤),0.01g/LPABA(对氨基苯甲酸)为标准品,进样量为20uL,在280nm检测柱效。
硅胶基质分子尺寸排阻色谱柱清洗方法(7.5x60cm)
100%纯水以0.2mL/min的流速冲洗3小时.
2.如果是疏水性吸附,以20%乙腈水溶液为流动相(用0.45um的有机相滤膜过滤),采用0.2mL/min的流速冲洗3小时.
3.100%纯水以0.2mL/min的流速冲洗3小时.
4. 如果是离子性物质的吸附,以0.1mol/LPB(0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4)缓冲液+0.1mol/LNa2SO4溶液为流动相(用0.45um的水相滤膜过滤),采用0.2 mL/min的流速冲洗1.5小时后,再以0.01g/LPABA(对氨基苯甲酸)为标准品,进样量为20uL,在UV280nm下,以0.1mol/LPB(0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4)缓冲液+0.1mol/LNa2SO4溶液为流动相检测柱效,。
5. 如果是碱性物质的吸附,以0.05mol/L的磷酸二氢钠溶液(用磷酸调整pH2.5)为流动相(用0.45um的水相滤膜过滤),采用0.2mL/min的流速冲洗3小时。
6. 如果上述处理后仍未能解决问题可能是氢键的吸附,在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或者0.2%-0.3%的中性界面活性剂(Triton、Tween)(用0.45um的水相滤膜过滤)后以0.2mL/min的流速冲洗3小时。但需要注意尿素和表面活性剂会在柱中残留。一般不建议此项操作。
7. 冲洗完成后,使用0.1mol/LPB(0.05mol/LNaH2PO4+0.05mol/LNa2HPO4)缓冲液+0.1mol/LNa2SO4溶液为流动相(0.45um水相滤膜过滤),0.01g/LPABA(对氨基苯甲酸)为标准品,进样量为20uL,在280nm检测柱效。
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