蜜饯null检测 | 蜜饯和糖果中8种合成着色剂的测定-深圳逗点生物技术有限公司

方案摘要

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应用领域	食品/农产品
检测样本	蜜饯
检测项目
参考标准	GB5009.35-2016

食品合成着色剂，也称为食品合成染料，被广泛应用到食品的加工过程中。鉴于合成着色剂的不安全性，国家加强了对这类合成着色剂的监管，制订了食品合成着色剂的测定标准（GB5009.35-2016）。

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配置单

Biocomma 多管涡旋混匀仪SDC-3000-D-15
型号：SDC-3000-D-15

¥2.88万
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智能水浴氮吹
型号： BN24

¥5.98万
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针式过滤器，PTFE，直径13mm，孔径0.22μm，有机系 100个/盒
型号：

¥128
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方案详情

蜜饯和糖果中8种合成着色剂的测定

（Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱）

《食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》

食品合成着色剂，也称为食品合成染料，被广泛应用到食品的加工过程中。鉴于合成着色剂的不安全性，国家加强了对这类合成着色剂的监管，制订了食品合成着色剂的测定标准（GB5009.35-2016）。

逗点生物依据国标的征求意见稿，建立了固相萃取-高效液相色谱法测定食品中8种合成着色剂含量的方法，样品经乙醇氨水提取后，经PWAX混合型弱阴离子交换柱净化，采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。经验证，8种合成着色剂在0.10 μg/mL到10 μg/mL范围内线性良好，R^2>0.995，加标回收率在80%-110 %范围内，符合测试需求。

1、样本前处理

1.1样品提取

准确称取样品2 g（精确至0.001 g），置于50 mL具塞离心管中，加入25 mL乙醇氨水溶液（硬糖需要先加入2 mL水超声使其溶解），涡旋1 min，50℃超声提取20 min，8000 转/分钟离心5 min，取上清液置于50 mL离心管中，残渣中再加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，即得提取液。准确吸取提取液10 mL，50℃下氮气浓缩至2 mL左右，分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，作为待净化液。

注：乙醇氨水溶液配制，量取无水乙醇700 mL，加入4 mL氨水，用水稀释并定容至1 L，混匀。

1.2试样的净化浓缩

先依次用6 mL甲醇和6 mL水活化WAX固相萃取柱（150 mg/6 mL），保持柱体湿润，将待净化液注入柱中，控制流出液流速在1滴/秒，弃去流出液。再依次用6 mL 2%甲酸水和6 mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱。最后用6 mL 2%氨化甲醇洗脱，分两次加入，收集洗脱液，于50 ℃氮吹至近干。准确加入2 mL pH=9的乙酸铵溶液溶解，过0.45 μm PTFE滤膜，弃去2~5滴初滤液，取续滤液作为待测液。

1.3空白实验

1.3.1过程空白：取一支洁净的50 mL具塞离心管，不称取试样，按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。

1.3.2空白本底实验

称取样品2 g（精确至0.001 g）按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。

2、标准系列工作液

精密移取着色剂混标中间液（1 μg/mL）0.10 mL、0.20 mL于2个1 mL色谱瓶中，再吸取混合标准中间液（10 μg/mL）0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50mL于3个1 mL色谱瓶中，分别用水定容至1 mL，混匀，得标准系列工作液。浓度分别为0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL、2.00 μg/mL、5.00 μg/mL和10.0 μg/mL。

3、仪器条件

仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪

色谱柱：CommaSil® C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)

流动相：A：20 mmol/L乙酸铵溶液 B：甲醇

洗脱方式：梯度洗脱，见表1

流速：1 Ml/min

柱温：30 ℃

进样量：10 Μl

检测器：紫外检测器

检测波长：415 nm、520 nm、610 nm

表1 梯度洗脱程度

时间/min	A/%	B/%
0.01	90	10
12.0	65	35
19.0	55	45
22.5	50	50
23.0	45	55
24.0	35	65
34.0	35	65
35.0	90	10
42.0	90	10

4、实验结果

4.1 加标回收

表1 加标浓度7.5 mg/kg竞品比对结果

样品	化合物	平均回收率（%）n=3
样品	化合物	Copure®	A品牌	D品牌
山楂	柠檬黄	91.3	95.4	94.3
	新红	95.5	96.1	94.3
	苋菜红	94.4	93.1	93.6
	胭脂红	92.3	88.9	85.8
	日落黄	92.6	95.3	95.1
	诱惑红	94.5	96.2	96.0
	赤藓红	94.5	90.6	71.2
	亮蓝	94.4	95.7	93.7

表2 加标浓度12.5 mg/kg竞品比对结果

样品	化合物	平均回收率（%）n=3
样品	化合物	Copure®	A品牌	D品牌
硬糖	柠檬黄	92.8	96.9	100
	新红	103	99.8	103
	苋菜红	105	98.2	101
	胭脂红	106	65.3	90
	日落黄	82.7	80.8	80.1
	诱惑红	103	103	101
	赤藓红	88.3	80.3	77.3
	亮蓝	101	97.3	96.4

图1 加标浓度为7.5 mg/kg时山楂中8种合成着色剂液相色谱图

图2 加标浓度为12.5 mg/kg时硬糖中8种合成着色剂液相色谱图

5、注意事项

1.在使用乙醇氨水溶液提取时，需要提取两次以上，提取一次可能会导致提取不充分，导致回收率偏低。

2.过柱前确认样液的Ph值＜6，以便于合成着色剂目标化合物和填料PWAX更好的结合。

3.上机之前过滤所用的针式过滤器不能使用尼龙针式过滤器，会吸附部分合成着色剂，导致回收率偏低，建议使用PTFE亲水针式过滤器。

4.在检测赤藓红时，需要注意在使用离心管氮吹时会有少量的赤藓红会附着在离心管上，可以采用涡旋和超声的方法进行溶解，使用玻璃的氮吹管更易溶解；或者在溶解的时候加入一定量的甲醇便于赤藓红的溶解。

六、订购信息

货号	描述	包装
COPWAX6150	Copure®混合型弱阴离子交换柱，PWAX,150 mg/6 Ml	30支/盒
HC1801	CommaSil® C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)	1根/盒
SDC-3000-D	biocomma® 多管涡旋混匀仪	1台/箱
BN24	biocomma® 24孔智能氮吹仪	1台/箱
SF130-22-PTFE-HL	亲水性PTFE针式过滤器，直径13mm，孔径0.22 μm，有机系	100个/盒
SC2-1	2 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425	100个/盒
V2-AL-N	2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425	100个/盒

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文献贡献者

深圳逗点生物技术有限公司

金牌会员丨第6年

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