大鼠纤维介素蛋白（fgl2）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

2016-05-05 08:39 下载量：1

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使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中纤维介素蛋白(fgl2)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠纤维介素蛋白(fgl2)水平。用纯化的大鼠纤维介素蛋白(fgl2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入纤维介素蛋白(fgl2)，再与HRP 标记的纤维介素蛋白(fgl2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的纤维介素蛋白(fgl2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠纤维介素蛋白(fgl2)浓度。操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 180ng/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 90ng/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液 45ng/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液 22.5ng/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液 11.25ng/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 个月

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文献贡献者

上海丰寿实业有限公司

铜牌会员 | 第3年

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