从PUBMED中查找人心脏cTnI和cTnC的cDNA序列,在两者之间加上15个中性氨基酸残基(G4S)3的linker编码序列,并分别构建原核表达质粒pET32a-cTnI-linker-TnC和pET28a-cTnI-linker-TnC,转化入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达。
通过SDS-PAGE电泳和间接ELISA对目的蛋白进行初步鉴定,并优化表达条件以实现目的蛋白的可溶性高表达。用标准抗cTnI单克隆抗体和标准抗cTnC单克隆抗体对目的蛋白进行Western blot 鉴定和双抗体夹心ELISA鉴定,同时用八位心肌梗塞患者血清做间接ELISA鉴定。
结果表明,cTnI-linker-TnC融合蛋白在表达载体pET32a中实现了可溶性高表达,最佳表达条件为28℃、0.4mmol/L IPTG、诱导表达5h;且融合蛋白具有较好的免疫原性,保存了cTnI和cTnC单体的天然结构,有望成为天然cTnI-TnC复合物的替代物,为下一步制备高特异性的抗cTnI-TnC复合物的单克隆抗体奠定了基础。
关注
相关产品
关注
拨打电话
留言咨询
