因为如果未结合的材料(如非特异结合的抗体或检测试剂)残留在微孔板中，ELISA试剂盒那么它会增加背景噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。
如果您一直被所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面ELISA试剂盒、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。
最常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%)，ELISA试剂盒它会降低特异结合，产生假阴性。另一个选择是使用型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。
四、注意事项：
1. 待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。
2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。
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