DNA核酸浓度的测定实验应用方案(超微量紫外分光法)

2022/05/25   下载量: 0

方案摘要

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应用领域 生物产业
检测样本 其他
检测项目 DNA纯度
参考标准 行业标准

紫外分光光度法基于DNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收,DNA/RNA在260nm处有最大的吸收峰,蛋白质在28Onm处有最大的吸收峰,盐和小分子则集中在230nm处。因此,可以用260nm波长进行分光测定核酸浓度,OD值为1相当于大约50ug/ml双链 DNA,单链DNA浓度约为33ug l ml,RNA约为40ug/ml,寡核苷酸约为35ug/ml。如用1cm光径,用 H,O稀释DNA/RNA样品n倍并以H,O为空白对照,根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度

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配置单
方案详情

寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA可以定量溶于缓冲液,构成核酸的嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键,使核苷核和核酸在紫外线光具有特征性的吸收光谱,最大吸收峰为260nm。窄光带紫外分光光度计,长260nm.,比色杯光径1cm1个吸光度值(1A)相当于50ug/ml双螺DNA40ug/ml单螺旋DNARNA),20 ug/ml寡核苷酸。

测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样品液。然而,实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大。


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