噬菌体载体

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噬菌体载体

（一）l噬菌体载体

1. 噬菌体的生物学特性

烈性噬菌体：只具有溶菌生长周期

温和噬菌体：具有溶源生长周期和溶菌生长周期

溶菌周期指噬菌体将DNA注入寄主细胞后很快环化，然后进行自我复制、蛋白衣壳合成和新噬菌体颗粒的组装，最后使寄主细胞破裂而释放出大量的子代噬菌体。

溶源周期中，注入寄主细胞的噬菌体DNA是整合到寄主细胞染色体上并可以随着寄主细胞的分裂而进行复制。

整合了一套完整的噬菌体基因组的细菌被称为溶源性细菌。在溶源性细菌内存在的整合或非整合的噬菌体DNA被称为原噬菌体。

2. l噬菌体的生物学特性

⑴组成：蛋白质外壳和线状双链DNA分子组成。

lDNA长度为48502bp，在分子两端各有12个碱基的单链互补粘性末端。当其注入到寄主细胞中后，可以迅速通过这两个粘性末端的互补作用形成双链的环形DNA分子。上述通过粘性末端互补形成的双链区被称为cos位点（cohesive end site）.细胞

⑵是一个温和噬菌体

一般以溶源生长进行增殖，胁迫条件下也会进入溶菌生长周期。

⑶复制

溶源周期随溶源细菌染色体一起复制

溶菌周期的早期是“θ”复制，晚期进行滚环复制

⑷基因组成

lDNA至少包括61个基因，大多基因按功能相似性成簇排列，其中一部分为噬菌体生命活动的必须基因，另一部分约1／3为非必须区段。

3. l噬菌体载体的类型

插入型（Insertion vectors ）

这种载体仅仅有一个可供外源DNA插入的克隆位点。

如：λgt10 、 λgt11

克隆能力小，不到10kb

置换型（Replacement vectors）

这种载体具有两个对应的酶切克隆位点，在两个位点之间的λDNA区段是λ噬菌体的非必需序列，可以被外源插入的DNA取代。细胞

如Charon 4 载体

克隆能力大，20～25kb

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