试剂盒试验注意事项简析

试剂盒试验注意事项简析

ELISA试剂盒试验时的注意事项如下：
     1.　正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
    2.　在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
    （1）　固相载体的选择：ELISA试剂盒许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
   （2） 包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。ELISA试剂盒蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。
    （3）　酶标记抗体工作浓度的选择：ELISA试剂盒首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
    （4）　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

血红素氧合酶-1/热休克蛋白-32抗体 Anti-HO-1/HSP32   0.1ml

血红素氧合酶-2抗体 Anti-HO-2   0.1ml

同源盒基因的一种 Anti-HOXc8   0.2ml

人类乳头状瘤病毒抗体 Anti-HPV   0.1ml

原癌基因H-ras抗体 Anti-H-ras   0.1ml

荷尔蒙敏感脂肪酸抗体 Anti-HSL   0.2ml

热休克蛋白-27抗体 Anti-HSP-27   0.1ml

热休克蛋白-60抗体 Anti-HSP-60   0.1ml

热休克蛋白-70抗体 Anti-HSP-70   0.1ml

热休克蛋白90α抗体 Anti-HSP-90α   0.1ml

热休克蛋白-90β 抗体 Anti-HSP-90β   0.1ml

 丝氨酸蛋白酶/线粒体丝氨酸蛋白酶抗体 anti-HtrA2/Omi 0.2ml

端粒酶抗体 Anti-hTRT  Telomerase catalytic subunit   0.1ml

兔抗人血清抗体抗血清 Anti-Human serumAnti-Human serum   1ml

hypothetical protein抗体 Anti-Hypothetical protein   0.2ml

吲哚-3-乙酸抗体/植物生长素抗体 anti-IAA 0.1ml

凋亡抑制因子5抗体 anti-IAP-5   0.2ml

肿瘤细胞凋亡ASPP家族的另一个成员抗体 Anti-IASPP   0.1ml

激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂 Anti-ICAD  Caspase 0.2ml

胰岛素降解酶抗体 Anti-IDE   0.1ml

 鼠抗人禽流感A核蛋白单克隆抗体 Mouse Anti-influenza A virus nucleoprotein Monoclonal   0.1ml

鼠抗人禽流感B核蛋白单克隆抗体 Mouse Anti-influenza B virus nucleoprotein Monoclonal   0.1ml

小肠型脂肪酸结合蛋白抗体 Anti-IFABP   0.2ml

干扰素诱导跨膜蛋白1抗体 Anti-IFITM1   0.2ml

干扰素-β抗体 Anti-IFN-β Anti-human   0.1ml

鼠抗人干扰素-γ/IFN-gamma单克隆抗体 Anti-IFN-γ 0.1ml

干扰素-γ抗体 Anti-IFN-γAnti-Human   0.1ml

干扰素-γ抗体 Anti-IFN-γAnti-mouse、rat   0.1ml

兔抗非洲爪蟾IGC抗体 Anti-IGC   1ml

胰岛素样生长因子-I受体抗体 Anti-IGF-1 R   0.1ml

胰岛素样生长因子结合蛋白-2抗体 Anti-IGFBP-2   0.2ml

胰岛素样生长因子结合蛋白-5抗体 Anti-IGFBP-5/IBP5   0.1ml

胰岛素样生长因子-I抗体 Anti-IGF-I   0.1ml

胰岛素样生长因子-II抗体 Anti-IGF-II   0.1ml