然而,用大肠杆菌?外源基因的表现时,常遇到的问题是,外源基因的产物会对寄主细菌造成伤害;此外,持续?断的表现外源基因也会使寄主细菌生长减慢或无法生长。因此,必须有适当的调控机制控制外源基因的表现。 我们所用的载体pQE31 在T5 promoter与外源基因插入地址的间,具有一段lac operon中的lacO序,可用lac repressor结合其上调控T5 promoter的启动,只有在inducer (如IPTG) 加入时,才会启动转录的进,而lac repressor的源则必须靠寄主提供。由于此质体为multiple copies,一般大肠杆菌菌株中lac repressor的含足以有效地进调控,纵使未加入inducer,也会有外源蛋白质的表现,万一外源蛋白质对寄主造成毒害,使的无法生长,我们可能表现质体无法选殖到,无法达成我们的实验目的。 我们所选用的寄主菌株JM109 所具有的 lacIq,能够过表现 (overproduce) lac repressor,因此可较有效地控制T5 promoter的启动。 然而,是JM109 这一类带有lacIq的菌株发生问题时,就必须再换其它的寄主菌株;?如M15[pREP4],此菌株除染色体上的lacI基因外,还带有能持续表现lacrepressor的质体,应可解决lac repressor 足的问题。
检定载体上是否接上外的DNA 片段,常因质体同而同方法,一般常用外DNA 片段的插入导致载体某表现形的丧失 (insertional inactivation)作为筛选的依据;或者可用插入的DNA 上带有宿主所缺少的表现型进筛选。载体与插入DNA 皆无适当的筛选依据,则可将菌中的质体抽出后,以限制酶作用后进电泳分析。而我们实验中所用的质体pQE31,并没有简快速筛选重组质体的方法可用,因此需要用GUS 的抗体进colony hybridization,寻找可表现出GUS的转形株;或在培养基中加入GUS 的基质,转形株可表现出GUS,则可将基质分解使菌呈现蓝色;或以质体快速抽取法,筛选带有正确分子质体的转形株。 三种方法请练习,得到的正反应株均必须再抽取质体进?限制酶分析,以进一步确认质体的正确性。
英文名称 Homo sapiens (Human) 肾结核蛋白4(NPHP4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 肾胶原凝集素1(CLK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 肾胱素7(NPHP7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 肾胱素5(NPHP5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
蛋白英文名称 Homo sapiens (Human) 肾病型胱胺酸症蛋白(CTNS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
英文名称 Homo sapiens (Human) 神经秩蛋白(NRTN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
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