人卵巢透明细胞癌细胞

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人卵巢透明细胞癌细胞培养的需要注意的一些问题,部分原因和解决方法

培养液pH值变化太快 

可能原因

建议解决方法

1.CO2张力不对

按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度,2.0g/L3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%10%

2.培养瓶盖拧得太紧

松开瓶盖1/4圈。

3.NaHCO3缓冲系统缓冲力不足

改用不依赖CO人卵巢透明细胞癌细胞2培养液。加HEPES缓冲液至1025mM终浓。

4.培养液中盐浓度不正确

CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液,在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。

5.细菌、酵母或真菌污染

丢弃培养物,或用抗生素除菌。

 培养细胞死亡 

可能原因

建议解决方法

1. 培养箱内无CO2

检测培养箱内CO2

2. 培养箱内温度波动太大

检查培养箱内温度

3. 细胞冻存或复苏过程中损伤

取新的保存细胞种

4. 培养液渗透压不正确

检测培养液渗透压。注意:大多数哺乳动物细胞能耐人卵巢透明细胞癌细胞受渗透压为260– 350   mOsm/kg。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。

5. 培养液种有毒代谢产物堆积

换入新鲜培养液

细胞影响因素

1.细胞的表面积与体积之比以及细胞核与细胞质体积之间的平衡:细胞通过它的表面不断地与周围环境或邻近细胞进行物质交换,这么它就必须有足够的表面积,否则它的代谢作用就很难进行。但细胞的体积由于生长而逐渐增大时,表面积与体积的比例就会变得越来越小,物质交换适应不了细胞的需要,这可以引起细胞的分裂,以恢复适宜的比例。同样的,细胞核中的遗传信息指引和控制范围有限,细胞核对太大范围的细胞质的调控作用就会相对减少。

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