供货周期: | 现货 |
品牌: | IBL-America |
规格: | 96T/48T |
货号: | XYA015Mu |
CAS号: |
小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR1A)ELISA试剂盒的技术要点包括三个方面:试剂的制备、反应条件的选择和操作的标准化。
一、试剂的制备
ELISA的主要试剂为固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。以下叙述这些试剂的原料和制备方法。
(一)固相载体
可作ELISA中载体的物质很多,最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能,抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫活性。聚苯乙烯为塑料,可制成各种形式。在ELISA测定过程中,它作为载体和容器,不参与化学反应。加之它的价格低廉,所以被普遍采用。
ELISA载体的形状主要有三种:小试管、小珠和微量反应板。小试管的特点是还能兼作反应的容器,最后放入分光光度计中比色。小珠一般为直径15px的圆球,表面经磨砂处理后吸附面积大增加。如用特殊的洗涤器,小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR1A)ELISA试剂盒在洗涤过程中使圆珠滚动淋洗,效果更好。最常用的载体为微量反应板,专用于ELISA测定的产品也称为ELISA板,国际通用的标准板形是8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测,有制成8联或12联孔条的,放入座架后,大小与标准ELISA板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测,并可在特定的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量反应板型的ELISA检测,包括加样、洗涤、保温、比色等步骤,对操作的标准化极为有利。
良好的ELISA板应该是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之间和同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工艺的差别,各种产品的质量差异很大。因此每一批号的聚苯乙烯制品在使用前须检查其性能。常用的检查方法为:以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA板各孔后,每孔内加入适当稀释的酶标抗人IgG抗人IgG抗体,保温后洗涤,加底物显色,终止酶反应后分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件,使各读数在0.8左右。计算所有读数的平均值。所有单个读数与平均读数之差应小于10%。小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR1A)ELISA试剂盒
与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。作为ELISA固相载体,聚氯乙烯板的特点为质软板薄,可切割,价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值有时也略高。
为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣,可用以下方法加以检验:用其它免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和一个典型的阴性标本。将它们分别进行一系列稀释后,在不同的固相载体上按预定的ELISA操作步骤进行测定,然后比较测定结果。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果判别最大,这种载体就是这一ELISA测定的最合适的固相载体。
除塑料制品外,固相酶免疫测定的载体还有两种材料:一是微孔滤膜,如硝酸纤维素膜、尼龙膜等,这类测定形式将在本章第五节“膜载体的酶免疫测定”中介绍。另一种载体是以含铁的磁性微粒制作的,反应时固相微粒悬浮在溶液中,具有液相反应的速率,反应结束后用磁铁吸引作为分离的手段,洗涤也十分方便,但需配备特殊的仪器。
小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR1A)ELISA试剂盒其它相关系列产品:
xyA950Hu 人血管性血友病因子裂解蛋白酶(vWFcp)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Von Willebrand Factor Cleaving Protease (vWFCP)
xyA170Hu 人激活素B(ACVB)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Activin B (ACVB)
xyB426Hu 人CD99分子(CD99)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Cluster Of Differentiation 99 (CD99)
xyA183Hu 人半乳糖苷酶α(GLα)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Galactosidase Alpha (GLa)
xyA692Hu 人神经纤维网蛋白1(NRP1)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Neuropilin 1 (NRP1)
xyD042Hu 人神经纤维网蛋白2(NRP2)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Neuropilin 2 (NRP2)
xyC608Hu 人黄嘌呤脱氢酶(XDH)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Xanthine Dehydrogenase (XDH)
xyG523Hu 人V-Yes-1 Yamaguchi肉瘤病毒相关癌基因同源物(LYN)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for V-Yes-1 Yamaguchi Sarcoma Viral
Related Oncogene Homolog (LYN)
xyD386Hu 人乳腺丝抑蛋白(Maspin)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Maspin
xyB510Hu 人白介素5受体α(IL5Rα)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Interleukin 5 Receptor Alpha (IL5Ra)
xyB626Hu 人白介素10受体α(IL10Rα)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Interleukin 10 Receptor Alpha (IL10Ra)
xyB441Hu 人溶酶体关联膜蛋白1(LAMP1)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Lysosomal Associated Membrane Protein 1 (LAMP1)
xyT653Hu 人CD200受体2(CD200R2)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for CD200 Receptor 2 (CD200R2)
xyJ550Hu 人胆绿素还原酶B(BLVRB)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Biliverdin Reductase B (BLVRB)
xyJ551Hu 人胆绿素还原酶A(BLVRA)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Biliverdin Reductase A (BLVRA)
xyG962Hu 人翻译调节肿瘤蛋白1(TPT1)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Tumor Protein, Translationally Controlled 1 (TPT1)
xyC099Hu 人整合素β6(ITGβ6)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Integrin Beta 6 (ITGb6)
xyH832Hu 人汗酸酶αL(IDUα)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Iduronidase Alpha L (IDUa)
xyL575Hu 人颗粒酶H(GZMH)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Granzyme H (GZMH)
xyL918Hu 人信号素3B(SEMA3B)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Semaphorin 3B (SEMA3B)
xyL924Hu 人信号素5A(SEMA5A)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Semaphorin 5A (SEMA5A)
xyM011Hu 人肽酶D(PEPD)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Peptidase D (PEPD)
xyM070Hu 人过氧蛋白同源物(PXDN)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Peroxidasin Homolog (PXDN)
xyM277Hu 人睾素2(TIC2)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Testican 2 (TIC2)
xyM410Hu 人双解丝蛋白1(TWF1)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Twinfilin 1 (TWF1)
(二)抗原和抗体
在ELISA实施过程中,抗原和抗体的质量是实验是否成功的关键因素。本法要求所用抗原纯度高,抗体效价高、亲和力强。
ELISA所用抗原有三个来源:天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于动物组织或体液、微生物培养物等,一般含有多种抗原成分,需经纯化,提取出特定的抗原成分后才可应用,因此也称提纯抗原(purifiedantigen)。重组抗原(recombinantantigen)和多肽抗原(peptideantigen)均为人工合成品,使用安全,而且纯度高,干扰物质少。因此虽然制备合成抗原有较高的技术难度且要求较为昂贵的仪器设备和试剂,其应用仍十分普遍,特别是对那些天然抗原不易得到的试验,更显出其独到之处。
用于ELISA的抗体有多克隆的和单克隆的。抗血清成分复杂,应从中提取IgG才可用于包被固相或酶标记。含单克隆抗体的小鼠腹水中的特异性抗体含量较高,有时可适当稀释后直接进行包被。制备酶结合物用的抗体的质量往往要求有较高的纯度。经硫酸铵盐析纯化的IgG可进一步用各种分子筛层析提纯。也可用亲和层析法提纯特异性IgG,如用酶消化IgG后提取的Fab片段,则效果更好。
(三)免疫吸附剂
固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。将抗原或抗体固相化的过程称为包被(coating)。由于载体的不同,包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板为载体,通常将抗原或抗体溶于缓冲液(最常用的为pH9.6的碳酸缓冲液)中,加于ELISA板孔中在4℃过夜,经清洗后即可应用。如果包被液中的蛋白质浓度过低,固相载体表面有能被此蛋白质完全覆盖,其后加入的血清标本和酶结合物中的蛋白质也会部分地吸附于固相载体表面,小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR1A)ELISA试剂盒最后产生非特异性显色而导致本底偏高。在这种情况下,如在包被后再用1%~5%牛血清白蛋白包被一次,可以消除这种干扰。这一过程称为封闭(blocking)。包被好的ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫活性。
相关产品
小鼠精氨酸加压素受体1B(AVPR1B)检测试剂盒
小鼠心肌肌钙蛋白T(TNNT2)检测试剂盒
小鼠谷氨酰胺酶2(GLS2)检测试剂盒
小鼠谷氨酰胺酶(GLS)检测试剂盒
小鼠胸肾表达趋化因子(BRAK)检测试剂盒
小鼠激肽原1(KNG1)检测试剂盒
小鼠VGF神经生长因子诱导蛋白(VGF)检测试剂盒
小鼠肝配蛋白B2(EFNB2)检测试剂盒
小鼠尿调蛋白(UMOD)检测试剂盒
小鼠胆碱乙酰转移酶(ChAT)检测试剂盒
小鼠脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNASE1)检测试剂盒
小鼠YY肽(PYY)检测试剂盒
小鼠N-乙酰半乳糖胺酶α(NAGα)检测试剂盒
小鼠信号素7A(SEMA7A)检测试剂盒
小鼠CD83分子(CD83)检测试剂盒
详细地址
关注
拨打电话
留言咨询