大鼠蛋白激酶CElisa试剂盒如何检验?

2015-04-27 16:27  下载量:1

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使用目的: 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中蛋白激酶C(PKC)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠蛋白激酶C(PKC)水平。用纯化的大鼠蛋白激酶C(PKC)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入蛋白激酶C(PKC),再与HRP标记的蛋白激酶C(PKC)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的蛋白激酶C(PKC)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠蛋白激酶C(PKC)浓度。 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 计算 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

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