在策划实验之前首要就要了解到该实验的复杂性,虽说ELISA操作简单,却步骤多而复杂,完美的ELISA实验如何执行操作?上海恒远教您几招实验注意:
看似很无聊,其实很重要的洗涤步骤中,如果未结合的材料残留在微孔板中,那么它会增加背景噪音。如有必要,可增加洗涤液中的盐浓度,这会阻止非特异结合反应。如果背景过高,而您怀疑洗涤不够时,可以尝试增加洗涤次数。
洗板方法有手工与自动两种,在加样步骤中注意:吸嘴的洁净与否和吸量的准确性,直接影响检测结果。由于吸嘴构造特殊,导致清洗困难,加大了交叉污染的机会。建议用一次性吸嘴。加样器也要经常清洗,定期校准。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出。
试剂盒规格有96T与48T两种,上海恒远所提供的高质量进口试剂盒供实验室研究使用,需要在2-8℃温度中保存,有效期为半年,也就是6个月。
1. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
2. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
3. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
ELISA包被用抗原或抗体的浓度,包被的温度和时间,包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液,也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置一个晚上,37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的最适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化,每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。
能够熟练的掌握好ELISA实验的每一步注意与技巧之后还怕结果不佳?配上上海恒远优质ELISA试剂盒定能助您实验成功!
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