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2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 

7. 温育:操作同3 

8. 洗涤:操作同5 

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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ELISA原理
今后的发展方向
●聚苯乙烯表面的高级制备。已有的技术是酰肼化(聚二氟乙叉,PVDF);生物素化;预包被多聚赖氨酸等,均是专利产品。
●酶促信号放大的改变,如酶促荧光、酶促化学发光等。

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