荧光纳米微球:
与经典的时间分辨荧光免疫分析方法DELFIA法不同,时间分辨荧光免疫层析技术采用荧光纳米微球作为标记物,每个微球中可包裹成千上万个荧光分子,大大提高了标记效率,有效的提高了灵敏度;同时纳米荧光微球表面修饰有合适密度的羧基,用于与蛋白或抗体的共价偶联,提高标记物的稳定性。
时间分辨荧光免疫层析原理:
当将含有待测抗原(抗体)的样品滴在加样区,待测样品中的抗原(抗体)与结合垫中的荧光纳米微球标记的抗体(抗原)结合并通过毛细作用向前层析,当达到检测区后,与检测线上固定的抗体(抗原)结合,形成微粒-抗体-抗原-抗体夹心复合物并被固定在检测线上,而多余的荧光微球标记物继续向前层析,与固定在质控线二抗结合。反应结束后,用紫外光源(340nm)对检测区扫描检测,检测线和质控线上荧光纳米微球发出高强度的荧光(615nm),且衰变时间也较长。利用延缓测量时间,待样品基质中自然发生的短寿命荧光(1-10ns)全部衰变后,再测量稀土元素的特异性荧光,这样就可以完全排除特异本底荧光的干扰。通过检测线和质控线荧光强度的强弱及其比值,即可分析出样品中待测物的浓度。
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