人黑色素细胞抗体ELISA试剂盒使用说明

2015-03-16 15:51  下载量:1

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血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原 和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红 细胞迅速小心地分离。 2、 血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、 细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、 组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。 5、 保存……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 操作步骤: 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。 在450nm波长处测定各孔的OD值。

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