人血管内皮生长因子 (VEGF)ELISA试剂盒使用说明书

2015-04-20 16:57  下载量:1

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标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于 -20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的( HRP)活性。操作步骤 1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 3 0分钟。 4.配液:将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此重复 5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同 3。 8.洗涤:操作同 5。 9.显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀, 37℃避光显色15分钟. 10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零, 450nm波长依序测量各孔的吸光度( OD值)。测定应在加终止1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔第一孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 . 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期 1.试剂盒保存:;2-8℃。 2.有效期: 6个月

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