人干细胞因子(SCF)ELISA试剂盒使用说明书

2015-05-25 16:15  下载量:1

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实验原理 人干细胞因子(SCF)ELISA试剂盒试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人干细胞因子(SCF)水平。用纯化的干细胞因子 (SCF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入干细胞因子(SCF),再 与 HRP标记的干细胞因子(SCF)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤 后加底物TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的 黄色。颜色的深浅和样品中的干细胞因子(SCF)正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光 度(OD值),通过标准曲线计算样品中人干细胞因子(SCF)浓度。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶 2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(180ng/L) 0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 .2. 不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤 1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10 孔,在第一、第二孔中分别加标 准品 100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二 孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl, 混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔 中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各 取 50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl,混 匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准 品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl, 浓度分别为(120ng/L,80ng/L ,40ng/L,20ng/L, 10ng/L)。 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样 品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同 3。 8. 洗涤:操作同 5。 9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止 液后 15分钟以内进行。

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