人PR免疫组化试剂盒实验方法

2015-06-15 16:25  下载量:1

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注意事项: 1. 修复后缓冲液须自然冷却,自来水冲洗后方能把切片取出,骤冷有可能导致 结晶或抗原封闭。 2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使 用。 3. 若试剂为微量浓缩液,用前应低速离心,将内盖和管壁附着的溶液离到底部。 4. 封片前一定要换用TBS 充分洗涤,以便洗去组织上残留的Tween 20,否则会 影响结果观察。 5. 如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封 片。 附1: 抗原修复方法 常用抗原修复液:柠檬酸缓冲液(0.01M pH6.0)、EDTA 抗原修复液(pH8.0 或 9.0)等等。 一、酶消化修复法 切片脱蜡水化处理,TBS 冲洗,在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育 20~30min 后TBS 冲洗即可。 二、微波抗原修复法 微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料 切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档或高档继续微波10~15min,取出微波 盒冷却至室温后,自来水冲洗,取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异, 须自行调整。 三、直接高压抗原修复法 取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾,将组织切片置于耐高温切片架上,修复 液沸腾后放入切片架,盖上锅盖,待喷气后计时1.5~2.5min 即可脱离热源,自 然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。 四、隔水式高压抗原修复法 不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾,微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸 腾,将切片放入微波盒中,再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖,待喷气后计时 4~8 min 即可关闭热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用 于较难检测或核抗原的修复。

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