人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA试剂盒实验原理

2016-04-27 09:22  下载量:1

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人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)elisa试剂盒实验原理: 本 试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)水平。用纯化的人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b),再与HRP标记的抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)抗体结 合,形成抗体抗原酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)浓度。 人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)ELISA试剂盒操作步骤: 1. 标准品的稀释: 本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl, 待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同 3。 8. 洗涤:操作同 5。 9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 10 分钟. 10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。 11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)ELISA试剂盒注意事项: 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡1530分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的 OD 值) ,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定, 计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5) 。 5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。

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