猪源支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因的原核表达及其抗体检测ELISA 方法

以猪源支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica, Bb)百日咳杆菌黏附素(PRN)基因的原核表达产物为抗原建立检测PRN 抗体的间接ELISA方法。

一、方法和结果：利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统对PRN 基因在大肠杆菌中进行融合表达。SDS-PAGE 和Western blot 检测证实该基因获得高效表达, 产物易于纯化且具有良好的免疫学活性。通过凝血酶酶切GST-PRN 并回收,获得不含GST 载体蛋白的PRN 蛋白片段。以PRN 蛋白片段为抗原建立检测天然PRN 抗体的间接ELISA 方法。该方法对猪巴氏杆菌病等7 种常见细菌性疾病阳性血清的检测结果均为阴性, 其敏感性比乳胶凝集试验提高4～128 倍, 能检测到人工感染14 d 后的仔猪血清抗体IgG, 对临床送检的1,229 份猪血清的检测阳性率为32.7%。ELISA 方法对阳性猪场的监测结果预示了保育期仔猪的合群导致猪群大量感染支气管败血波氏杆菌。

二、结论：该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于猪群PRN 抗体水平监测和猪波氏菌病流行病学调查。