供货周期: | 一周 |
品牌: | 子起生物 |
规格: | 咨询客服 |
货号: | 299-75001 |
CAS号: | 咨询客服 |
Wako Pure Chemical ScreenFect? siRNA Transfection reagent 299-75001检测试剂盒
【品名】ScreenFect? siRNA Transfection Reagent
Wako Pure Chemical ScreenFect? siRNA Transfection reagent 299-75001检测试剂盒
咨询电话:
ScreenFect? siRNA高性能 转染试剂,
【货号和规格】
299-75001 0.2ml
295-75003 1ml
293-75004 1ml×5
【保存条件】2-8度
Wako Pure Chemical ScreenFect? siRNA Transfection reagent 299-75001检测试剂盒
【产品特点】 可以与任何市售任何优质血清和抗生素兼容
成功转染后,不需要再另外更换培养基
SiRNA 转染的缓冲液是配套的,且经过优化
细胞毒性低
SiRNA使用量小,低浓度siRNA即可高效诱导基因沉默
为了达到高的转染效率,在转染实验过程中,需要注意以下几点:
1.纯化siRNA
Wako Pure Chemical ScreenFect? siRNA Transfection reagent 299-75001检测试剂盒
在转染前要确认siRNA的大小和纯度。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。
Wako Pure Chemical ScreenFect? siRNA Transfection reagent 299-75001检测试剂盒
2.避免RNA酶污染
微量的RNA酶将导致siRNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过的物品或暴露在空气中的物品等,此保证实验每个步骤不受RNA酶污染非常重要。
Wako Pure Chemical ScreenFect? siRNA Transfection reagent 299-75001检测试剂盒
3.健康的细胞培养物和严格的操作确保转染的重复性
通常,健康的细胞转染效率较高。此外,较低的传代数能确保每次实验所用细胞的稳定性。为了优化实验,推荐用50代以下的转染细胞,否则细胞转染效率会随时间明显下降。
Wako Pure Chemical ScreenFect? siRNA Transfection reagent 299-75001检测试剂盒
4.避免使用抗生素
Ambion公司推荐从细胞种植到转染后72小时期间避免使用抗生素。抗生素会在穿透的细胞中积累毒素。有些细胞和转染试剂在siRNA转染时需要无血清的条件。这种情况下,可同时用正常培养基和无血清培养基做对比实验,以得到最佳转染效果。
Wako Pure Chemical ScreenFect? siRNA Transfection reagent 299-75001检测试剂盒
5.选择合适的转染试剂
针对siRNA制备方法以及靶细胞类型的不同,选择好的转染试剂和优化的操作对siRNA实验的成功至关重要。
6.通过合适的阳性对照优化转染和检测条件
对大多数细胞,看家基因是较好的阳性对照。将不同浓度的阳性对照的siRNA转入靶细胞(同样适合实验靶siRNA),转染48小时后统计对照蛋白或mRNA相对于未转染细胞的降低水平。过多的siRNA将导致细胞毒性以至死亡。
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7.通过标记siRNA来优化实验
荧光标记的siRNA能用来分析siRNA稳定性和转染效率。标记的siRNA还可用作siRNA胞内定位及双标记实验(配合标记抗体)来追踪转染过程中导入了siRNA的细胞,将转染与靶蛋白表达的下调结合起来。
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