供货周期: | 现货 |
品牌: | ATCC |
规格: | 株 |
货号: | yb3309 |
CAS号: |
PC14细胞具体操作:
1.首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍,(这是前奏,即为第一步,目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。
2.然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步(可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了)。
3.吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比)这是第三步。
4.然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,呵呵。继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养(根据实际情况你自己把握)。
PC14细胞应用举例:
1.细胞表面分子的检测与分析;
2.细胞内或细胞核内抗原检测与分析——如胞内细胞因子、调节性T细胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+);
3.细胞凋亡的检测与分析——如PI单染法、Annexin-V-PI复染法、末端转移酶标记技术(TUNEL)、细胞周期特异性细胞凋亡的检测(PI-Annexin-V,PA法);
4.DNA含量检测与细胞周期的分析——如药物对细胞周期的影响、流式细胞核型分析;
5.细胞增殖的检测与分析。
PC14细胞服务流程:
1.根据细胞特点、实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定实验方案;
2.进行预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂,并优化转染条件;
3.杀伤曲线绘制;
4.转染质粒,铺板,用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆;
5.qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
PC14细胞注意事项:
1. 原代培养,一定要避免污染。
2. MEF生存能力有限,如果不冻存,体外存活十代左右。
3. 冻存后复苏的细胞只能传代一次,因为这些细胞繁殖能力有限。
4. 消化细胞时间不要过长。
一般实验流程
1筛选浓度测定:以10~14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度
2细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖
3细胞转染(病毒、脂质体、电穿孔、FuGENE 6)
4利用质粒上含有的抗性选择进行筛选
5鉴定筛选结果
PC14细胞相关产品展示:
yb-10647 人乳腺癌组织源细胞 Breast cancer cell
yb-10648 人肺癌组织源细胞 Lung Cancer cell
yb-10649 人胶质瘤组织源细胞 Gliomas cell
yb-10650 人宫颈癌组织源细胞 Cervical Cancer cell
yb-10651 人皮肤癌组织源细胞 Skin Cancer cell
yb-10652 人子宫肌瘤组织源细胞 Uterine fibroids cell
yb-10653 人直肠癌组织源细胞 Colorectal cancer cell
yb-10654 人胰腺癌组织源细胞 Pancreatic Cancer cell
yb-10655 人前列腺癌组织源细胞 Prostate Cancer cell
yb-10656 人胃癌组织源成纤维细胞
yb-10657 人髓母细胞瘤组织源细胞
yb-10658 人食管癌组织源成纤维细胞
yb-10659 肺微血管内皮细胞 Pulmonarymicrovascularendothelialcells
yb-10660 肺大动脉内皮细胞 Pulmonary aorta endothelialcells
yb-10661 肺大动脉平滑肌细胞 Pulmonary aorta smooth musclecells
yb-10662 肺大静脉内皮细胞 Pulmonary vein endothelial cells
yb-10663 肺大静脉平滑肌细胞 Pulmonary veinsmooth musclecells
yb-10664 肺动脉纤维原细胞 Pulmonary veinfibroblastscells
yb-10665 肺泡上皮细胞 Alveolar epithelial cells
yb-10666 气管上皮细胞 Tracheal epithelial cells
yb-10667 支气管上皮细胞 Bronchial Epithelial Cells
yb-10668 小气道上皮细胞 Airwayepithelial cells
yb-10669 肺纤维原细胞 Pulmonary fibroblastscells
yb-10670 支气管平滑肌细胞 Bronchialsmooth muscle
yb-10671 小气道平滑肌细胞 Airwaysmooth muscle cells
yb-10672 气管平滑肌细胞 Trachealsmooth muscle cells
yb-10673 呼吸道上皮细胞
yb-10674 支气管成纤维细胞 Bronchial fibroblasts cells
yb-10675 心房肌细胞 Atrial myocytesfibroblastscells
yb-10676 心室肌细胞 Ventricular myocytes cells
yb-10677 心脏纤维原细胞 Heart fibroblastscells
yb-10678 心脏微血管内皮细胞 Cardiac microvascularendothelial cells
yb-10679 主动脉内皮细胞 aorta endothelial cells
yb-10680 主动脉平滑肌细胞 Aortasmooth muscle cells
yb-10681 脐静脉内皮细胞 Umbilical vein endothelial cells
yb-10682 脐动脉内皮细胞 Umbilical artery endothelialcells
yb-10683 脐静脉平滑肌细胞 Umbilical vein smooth musclecells
yb-10684 脐动脉平滑肌细胞 Umbilical arterysmooth musclecells
yb-10685 大隐静脉平滑肌细胞 Saphenous vein smooth musclecells
yb-10686 冠状动脉内皮细胞 Coronary artery endothelialcells
yb-10687 大隐静脉内皮细胞 Saphenous vein endothelial cells
yb-10688 食管上皮细胞 Esophageal epithelial cells
yb-10689 食管平滑肌细胞 Esophageasmooth muscle cells
yb-10690 肠微血管内皮细胞 Intestinal microvascularendothelial cells
yb-10691 肠动脉内皮细胞 Intestinalarteryendothelialcells
yb-10692 肠静脉内皮细胞 Intestinalveinendothelial cells
yb-10693 小肠平滑肌细胞 Intestinal smooth muscle cells
yb-10694 结肠平滑肌细胞 Colonic smooth muscle cells
yb-10695 直结肠平滑肌细胞 Rectal smooth muscle cells
yb-10696 小肠粘膜上皮细胞 Small intestinal epithelialcells
yb-10697 结肠粘膜上皮细胞 Colonicepithelial cells
yb-10698 直肠粘膜上皮细胞 Rectalepithelial cells
相关产品
小鼠氢/钾离子交换ATP酶β肽检测试剂盒,ATP4β试剂盒
小鼠丙酮酸羧化酶检测试剂盒,PC试剂盒
小鼠海藻糖酶检测试剂盒,TREH试剂盒
小鼠含铜胺氧化酶3检测试剂盒,AOC3试剂盒
小鼠补体成分4b检测试剂盒,C4b试剂盒
小鼠前蛋白转化酶枯草溶菌素9检测试剂盒,PCSK9试剂盒
小鼠双特异性磷酸酶1检测试剂盒,DUSP1试剂盒
小鼠巯基丙酮酸硫转移酶检测试剂盒,MPST试剂盒
小鼠D-多巴色素变位酶检测试剂盒,DDT试剂盒
小鼠Ⅶ型胶原检测试剂盒,COL7试剂盒
小鼠归巢关联细胞黏附分子检测试剂盒,HCAM试剂盒
小鼠白细胞弹性蛋白酶抑制因子检测试剂盒,LEI试剂盒
小鼠L1-细胞粘附分子检测试剂盒,L1CAM试剂盒
小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素检测试剂盒,TSLP试剂盒
小鼠毒蕈碱型胆碱受体M2检测试剂盒,CHRM2试剂盒
详细地址
联系电话
关注
拨打电话
留言咨询