供货周期: | 现货 |
品牌: | Ambion |
规格: | 96T/48T |
货号: | ybG040Ra |
CAS号: |
酶联免疫检测技术(ELISA试剂盒检测方法)是20世纪60年代末期发展起来的一种免疫学检测方法,是目前最广泛应用的标记免疫技术。1966年Nakene和Pierce共同发表了《酶标抗体:制备和抗原定位中的应用》,首先提出了酶联免疫技术(ELISA试剂盒检测方法)的基本原理。1971年Engvall和Perlmann发表《ELISA KIT方法吸附试验测定IgG含量》一文,使酶联免疫(ELISA试剂盒检测)技术成为一种实用的检测液体标本中微量物质的方法。目前酶联免疫(ELISA试剂盒)检测技术已广泛用于免疫学、微生物学、寄生虫学等。由于其具有灵敏度高、试剂稳定、设备简单、操作安全等优点,近几年也将其应用到食品领域中来检测某些食品中的生理活性物质。
大鼠组胺H4受体检测试剂盒,HRH4试剂盒吸附法测定抗体含量(竞争法)
1、仪器设备
酶联免疫检测仪(Bio-550);酶标板 (96孔);微量注射器。
2、试剂
(1)HRP标记羊抗兔Ig G(1:1 000,国产);标准牛IgG;兔抗牛血清(1:256);
(2)包被液:0.05mol/L pH9.6碳酸缓冲液,4℃,保存, Na2CO3 0.15g, NaHCO3 0.293g,蒸馏水稀释至100 mL。
(3)稀释液与洗涤液:0.01mol/LpH7.4 PBS--Tween--20, 4℃,保存。NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4·12H2O 2.9g, Tween—20,0.5mL。蒸馏水加至1000mL。
(4)封闭液:含0.1%明胶0.01mol/L PBS, pH7.4。
(5)邻苯二胺底物溶液(临用前配制):临用前将Na2HPO4·12H2O 2.9g,柠檬酸0.51g溶于100mL蒸馏水中, 再加入40mgOPD,40μL30%H2O2。
(6)终止液:2mol/LH2SO4。于500mL蒸馏水中加入98%浓硫酸76mL混均即可。
3、大鼠组胺H4受体检测试剂盒,HRH4试剂盒操作方法
(1)将抗原结合在酶标板上。取标准IgG(10mg/mL)用碳酸盐缓冲溶液稀释,得到浓度为0.1μg/mL的包被液,每孔加人100μL抗原包被液,并以不加标准抗原的两孔为对照,为反应的0%值,将反应板于4℃放置一夜(8个样品,分3个平行,4个100%值孔;共28+2孔)。
(2)标准牛IgG与初级抗体一兔抗牛血清的反应。将标准IgG(10mg/mL)用稀释液作二倍稀释得到一系列不同浓度的标准牛IgG(4μg/mL至0.325μg/mL)各200μL,加到入32倍稀释好的200μL的兔抗牛血清中,其中4个不加标准牛IgG作为测量时的100%值。4℃反应放置一夜。
(3)大鼠组胺H4受体检测试剂盒,HRH4试剂盒封闭板。将包被好的酶标板孔内液体倾去,进行洗涤,各孔加200μL洗涤液后室温下放置1min,倒掉,如此重复4次后,在吸水纸上拍干,加封闭液进行封闭,在37℃放置45min(注意:空白孔也要加封闭液)。封闭后,如前述洗涤。
(4)向酶标板中加人标准抗原和抗体的混合物。将标准牛IgG和兔抗牛血清的混合物取100μL加入到酶标板孔内,同是4个未加抗原的100%值的平行样也加入酶标板中。37℃放置2h,再洗板4次。
(5)加人HRP标记的羊抗兔Ig G。洗涤后每孔加100μL稀释好的HRP-羊抗兔IgG,37℃放置1h,洗涤。
(6)加人OPD底物。洗板4次后,每孔加人100μL底物溶液,于37℃暗处反应20min后,每孔加人50μL结束反应液以终止反应。
(7)吸收测定。用酶联免疫检测仪测定波长为492nm下的吸光值。
(8)数据处理。大鼠组胺H4受体检测试剂盒,HRH4试剂盒标准曲线是以Ig(标准牛IgG含量)对B/Bo作图,求得线性方程。其中,C为标准牛IgG含量;B为不同浓度标准牛IgG吸收值与0%吸收值之差;Bo为100吸收值与0%吸收值之差。
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